反刍动物感染模型-肠出血性大肠埃希菌动物模型

反刍动物感染模型的基本原理是牛、羊、鹿等反刍动物是 EHEC 的天然宿主，很容易感染 EHEC 。此模型的关键是在感染动物前需要对动物是否曾经或正携带有 EHEC 进行系统评价，以排除过继感染对模型的影响。

EHEC 感染反刍动物校型主要应用于兽医领域，包括预防性 EHEC 疫苗的效果评价、抗生素对 EHEC 感染携带率的影响观察等方面。

器材：牛，摇床

试剂：

① 链霉素溶液

② 无菌 PBS

③ LB 液体培养基

反刍动物感染模型的基本过程可分为如下几步：

A. 细菌制备：细菌计数：将细菌接种到 LB 固体培养基上,37 ℃ 培养 18 小时。挑取单个菌落接种到 LB 液体培养基内， 37 ℃、150 r/min 摇床上培养过夜。取 100 μL 菌液接种千 10 ml LB 液体培养基内，37 ℃、150 r/min 摇床上培养，分别在 5 个不同的时间点取 1.5 ml 菌液，在入 = 600nm 处测定其吸光度值。取 100 μL 菌液加入到 900 μL 的无菌 PBS 中，充分混匀后，内取 100 μL 稀释后菌液加入到 900 μL 的无菌 PBS 中，混匀，如此反复、最后按照 10 倍梯度倍比稀释至 1:100。从每管中各取 100 μL 稀释后的菌液加入到 LB 平板上，用无菌 L 玻棒涂抹均匀，放入 37 ℃ 孵箱内培养 18 小时后进行平板计数。最后根据光密度值和细菌浓度对数值 ( Ig ) 之间的对应关系求得线性回归方程。

B. 牛的准备：常规实验条件饲养牛，采集牛的粪便进行培养，对粪便中的菌落进行生化鉴定，检测粪便中 EHEC 的排菌情况；静脉采集牛血清，通过 ELISA 方法检测血清中抗 Six 毒素、intimin 等抗原的特异性抗体，进一步检测实验动物的感染情况。

C. 攻毒：通过胃部插管方法，直接将 1X10⁸ CFU EHEC 细菌直接灌入胃或肠道。

D. 观察：可以观察牛肠道病理改变、粪便性状改变及粪便细菌培养计数，观察动物带菌情况。