简介
小鼠感染模型是通过口服途径感染细菌，并将 EHEC 在肠道定植后、释放毒素并引起小鼠病理改变和死亡。
原理
EHEC 通常不能定植并感染小鼠，所以 EHEC 感染模型所用的小鼠需使用营养障碍、先天性抵抗力低的小鼠或抗生系处理破坏肠道正常菌群的普通小鼠，通过口服途径感染细菌。EHEC 在肠道定植后、释放毒素并引起小鼠病理改变和死亡。
用途
EHEC 感染小鼠模型主要应用于菌株毒力基因的评价、EHEC 疫苗免疫原性和免疫保护性的评价以及被动免疫治疗性抗体效果的评价等方面。
材料与仪器
器材：5 周龄的 BALB/c 小鼠，摇床
试剂：
① 链霉素溶液
② 无菌 PBS
③ LB 液体培养基
步骤
小鼠感染模型的基本过程可分为如下几步：
A. 小鼠预处理：选用 5 周龄的 BALB/c 小鼠，于实验前一周分笼饲养。经一周适应期后称重，所有实验小鼠经口灌胃链霉素溶液以清除其肠道内的正常菌群。根据人与动物给药剂量换算法计算出每只小鼠的给药剂妎约为 12.2 mg。用灌胃针经口将链霉素溶液注入小鼠体内、每天分上、下牛两次给药，连续进行 3 天。
B. 细菌计数：将细菌接种到 LB 固体培养基上,37 ℃ 培养 18 小时。挑取单个菌落接种到 LB 液体培养基内， 37 ℃、150 r/min 摇床上培养过夜。取 100 μL 菌液接种千 10 ml LB 液体培养基内，37℃、150r/min 摇床上培养，分别在 5 个不同的时间点取 1.5 ml 菌液，在入 = 600 nm 处测定其吸光度值。取 100 μL 菌液加入到 900 μL 的无菌 PBS 中，充分混匀后，内取 100 μL 稀释后菌液加入到 900 μL 的无菌 PBS 中，混匀，如此反复、最后按照 10 倍梯度倍比稀释至 1:100。从每管中各取 100 μL 稀释后的菌液加入到 LB 平板上，用无菌 L 玻棒涂抹均匀，放入 37 ℃ 孵箱内培养 18 小时后进行平板计数。最后根据光密度值和细菌浓度对数值 ( Ig ) 之间的对应关系求得线性回归方程。
C. 攻毒细菌液的制备：将 EHEC 接种到 LB 固体培养基上，37 ℃ 培养 18 小时挑取单个菌落接种到 LB 液体培养基内。37 ℃、150 r/min 摇床上培养过夜。取 100 μL 菌液接种于 10 ml LB 液体培养基内，37 ℃、150 r/min 摇床上培养约 2 小时，使细菌达到对数生长期，在入 = 600 nm 处测定其吸光度值。根据线性回归方程求得菌液浓度，吸取一定量的菌液， 5000 r/min 离心 5 分钟，弃上清。用无菌 PBS 洗涤菌体 2 次后，以 LB 培养液重悬菌体，并调整细菌浓度至 1X1010 CFU/ml。
D. 攻毒方法及剂量：试验前 1 天，所有小鼠停止正常的饮水和饮食，将笼子倒扣，防止其饥饿后饮食粪便。用灌胃针吸取制备好菌液，经口灌入到实验组小鼠体内，每只 0.5 ml (约含 0.5 X 1010 CFU 的活菌），间隔 6 小时后再重复灌菌一次，每只小鼠的实际灌菌量约为 1X1010 CFU 。对照组小鼠用 LB 培养液进行灌胃, 其剂量和方法同实验组。所有小鼠在灌菌结束后，经腹腔注射丝裂霉素 (2.5 mg/kg), 其目的是破坏小鼠体内白细胞，造成小鼠免疫功能下降，易千感染。最后恢复小鼠正常饮食和饮水E 生存状况及病理学检测: 每天观察小精神行为，食欲等临床症状、对其生存状况进行记录，并绘制生存曲线。小鼠死亡后可取结肠及肾脏标本进行病理组织学检查。
来源：丁香实验
