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免疫细胞化学技术 - 悬浮细胞样本的制备 - 甩片法

相关实验:免疫细胞化学技术-细胞样本的制备

最新修订时间:

简介

悬浮细胞样本的制备,是免疫细胞染色步骤之一。

原理

悬浮细胞样本的制备的基本原理是甩片法是用离心方法将细胞甩至载玻片上。需要注意的是离心力可使细胞压瘪并扩张,使抗体更容易结合细胞内部结构。

材料与仪器

器材:离心机、载玻片。


试剂:


① 细胞培养液;
② PBS;


步骤

悬浮细胞样本的制备-甩片法的基本过程可分为如下几步:

A. 用 PBS 洗涤细胞(400xg,离心 5 分钟),细胞重悬于 PBS 中。调整浓度至 0.5x105/ml-1x106/ml。
B. 将载玻片固定于甩片机的转头上,然后加入 0.1-0.5 ml 细胞悬液。
C. 迅速使离心力达到 1200xg,离心 5-10 分钟。
D. 室温静置 15 分钟,使载玻片上的单层细胞在空气中干燥。
E. 细胞可进行固定。

注意事项

背景偏高,原因是多聚赖氨酸与抗体结合,应在加入特异性抗体之前,进行非特异性蛋白封闭。

来源:丁香实验

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