细胞爬片、甩片的制备
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(一)细胞爬片的制备
(1)如果使用载玻片或盖玻片,必须在使用之前灭菌。可以一次灭菌并贮存在无菌状态下。如果使用少量的盖玻片,用金属镊子夹住盖玻片,在70%乙醇中浸泡,然后在火焰上烤干。要轻轻地镊取,以防破裂。为了方便起见,可以将盖玻片浸泡于70%的乙醇中,使用时放在火焰上处理。如果使用的盖玻片或载玻片数量较多,可以将它们放于专用的金属支架上,然后高压消毒。如果需要的数量更大,则可将其放在耐热的容器中,干烤2小时。
(2)在无菌状态下,把干燥的玻片放于适当的培养皿中。盖玻片可以用金属镊子镊取,圆形盖玻片可以放在24孔培养板的孔中,直径90mm的培养皿能够放入10-15张盖玻片,或者放入一张标准的载玻片。
(3)将悬浮的细胞放入组织培养皿中,培养至少24小时,让细胞贴附在玻片上。要想得到一个较好的结果,在加细胞时,密度应低,以防细胞密度过高。
(4)如果细胞数目有限,可把细胞悬液直接滴在玻片上,静置4小时后再轻轻加入培养液。通过这种方式,大部分细胞将粘附于玻片上,然后再培养约24小时,使细胞适当扩增。此时,取出载玻片或盖玻片可进行固定。(二)细胞甩片的制备
(1)用PBS洗涤细胞(400×g离心5min),并重悬于PBS中。调整浓度至1×106 /ml~2×106 /ml;
(2)将载玻片固定于甩片机的转头上,然后加入0.1ml细胞悬液;
(3)迅速使离心力达到1200×g,离心5~10min; (4)使玻片上单层细胞在空气中干燥15~20min。此时,细胞可进行固定。