简介
同所有的代谢和内分泌测试一样,小鼠遗传背景是很重要的。糖耐量试验表明肝脏浓缩和储存葡萄糖的效率,胰腺产生胰岛素的能力,有活性的胰岛素的量及体细胞对其的灵敏度。OGTT 优于 IPGTT 或糖钳的地方在于其是在正常生理条件下进行的,并保持了肠道对激素的反应,及生理条件下葡萄糖吸收和胰岛素分泌的动力学。
GTT 的结果可能显示糖耐量正常或异常。糖耐量下降,即血糖曲线高于野生型,通常提示该个体糖清除能力较低,如胰岛素抵抗的 2 型糖尿病。然而,其他疾病如血红蛋白沉着病,或糖皮质激素或肾上腺素在体循环中水平增加等,也可能造成相似的结果,需要排除。然而糖耐量增加的情况,即曲线的峰值比正常低,通常提示胰岛素分泌增加或胰岛素的敏感性改善。原因可能为胰岛素分泌过剩,糖皮质激素生产不足,或产能物质的供给不足(如肝损伤,肝来源酶的不足,吸收不良等)。
材料与仪器
器材:血糖仪、血糖试纸
试剂:
① 葡萄糖
② 生理盐水
步骤
腹腔或口服葡萄糖耐量试验的基本过程可分为如下几步:
A. 小鼠准备 每组实验(如不同基因型或给药组)小鼠数量不得少于 6 只,对照组必须是同年龄、同性别的小鼠。于实验前一天下午 5 点将小鼠换入干净的笼子禁食 16 小时,至次日上午 9 点。禁食期间,小鼠保持正常的饮水。
B. 次日上午 9 点,开始葡萄糖耐受实验。称取每只小鼠的体重,并用标记笔在小鼠尾巴的根部标记序号,以便在实验过程中能快速辨认所测小鼠。
C. 空腹基础血糖的测定 将小鼠从笼子中取出,轻放于铁网格之上,用剪刀剪去小鼠尾巴末端 1~2 mm,轻轻挤压小鼠尾巴,让血液富集成一滴,用血糖仪测定空腹血糖,测定值认定为 0 分钟的血糖值。操作尽量轻柔,使小鼠不至于过度惊吓。
D. 小鼠适应 30 分钟之后,开始准备腹腔注射葡萄糖(IPGTT)或灌胃葡萄糖(OGTT)。
E. IPGTT 将小鼠轻轻抓起,按照标准的腹腔注射操作,用 1 ml 注射器给小鼠注射葡萄糖溶液。注射的体积根据小鼠的体重而定,每克体重注射 0.01 ml。从注射完毕一刻起开始计时;OGTT:将小鼠轻轻抓起,按照标准灌胃操作,用 1 ml 注射器连接灌胃针给予小鼠葡萄糖溶液。灌胃的体积根据小鼠的体重决定,每克体重灌胃 0.01 ml。从灌胃完毕一刻起开始计时。一般情况下,每只小鼠的操作间隔在 1 分钟,这样可以准确地按照所规定时间完成对每只小鼠的血糖测定。
F. 在 15 分钟,30 分钟,60 分钟,90 分钟,120 分钟按照步骤 3 的操作测定每只小鼠各时间点的血糖值。
G. 实验完毕后,将每笼小鼠补充上饲料。用 Excel 软件分析实验结果。结果示例见图 8-9-5。
注意事项
小鼠葡萄糖耐受实验的葡萄糖使用量一般为 1.5 g/kg 或 2 g/kg,根据具体的实验要求配制合适浓度的葡萄糖溶液。如葡萄糖使用量是 2 g/kg,则用生理盐水配制 20% 的葡萄糖溶液。
来源:丁香实验