简介
扩散盒器官培养法是体内、体外相结合的器官培养方法。
该方法既有体外易操纵的便利,又在一定程度上模拟了体内条件因此,近年来多为细胞生物学、肿瘤学以及药理学研究者所采用。该法也称半体内、半体外器官培养法。
原理
扩散盒器官培养法的基本原理是单层癌细胞黏附于靶器官后置于扩散盒内,加 0.2~0.4 mL 培养液,再密封扩散盒,用无菌手术方式对目标器官进行培养。
材料与仪器
器材:
① 小鼠
② 欲培养的器官或组织
③ 扩散盒(有售)
④ 动物手术器械
⑤ 组织学切片
⑥ 染色设备
试剂:
① 一般常用培养基(不含血清)
② 消毒液
③ 麻醉剂
步骤
扩散盒器官培养法的基本过程可分为以下几步:
A. 将欲培养的组织切成 1 mm3 左右小块,置扩散盒内,每盒可放 1~3 块组织。
B. 在扩散盒内加 0.2~0.4 mL 培养基,盖好。
C. 在无菌条件下,打开麻醉小鼠的腹腔,将扩散盒植入腹腔内,缝合伤口及皮肤。
D. 手术后的小鼠要单独饲养,以防相互格斗,咬破腹腔,导致实验失败。
E. 根据实验而定取材作组织学切片或电镜观察。
注意事项
1. 也有学者将扩散盒植于小鼠皮下,但营养供应不如腹腔。
2. 本实验最适于研究药物对肿瘤的作用以及体内各因素对培养物的影响。
来源:丁香实验