简介
不锈钢金属网格器官培养法是由 Trowell 于 1954 年创立,是利用金属网格作为器官的支持物漂浮于培养液表面进行器官培养。
原理
不锈钢金属网格器官培养法的基本原理是利用坚硬的支持物保证能够平稳、安全地支托或移动大量的培养器官,使得器官能在体外进行生长。
材料与仪器
器材:
① 要培养的组织或器官
② 塑料培养皿
③ 一个有高起平台的不锈钢网格平台
④ CO2 孵箱或湿润饱和的普通温箱
⑤ 组织学切片染色设备
试剂:
① RPMI-1640 培养基
② 小牛血清
③ 鸡胚提取液
步骤
不锈钢金属网格器官培养法的基本过程可分为以下几步:
A. 将平台置于培养皿中,平台上放 1 片擦镜纸或微孔滤膜,或涂一薄层琼脂,将欲培养的外植物放置在平台的滤膜(或擦镜纸、薄层琼脂)上。
B. 加入培养液,使其与金属网格平齐,恰好保持滤膜的湿润,培养液为含 5% 小牛血清的 RPMI-1640 与鸡胚提取液混合液(体积比为 5:1)。
C. 置于湿润的 CO2 孵箱内温育,或可置入一种有气体进出口的 Trowell 灌注小室内。
D. 一般每隔 3 d 换液 1 次,切勿让液体漫过外植物。
E. 固定,切片,染色方法同一般组织学技术。
注意事项
1. 即使最佳的培养条件,要保持器官培养存活与健康生长 7~10 d 以上也颇为困难,因此,器官培养更适于短期实验。
2. 培养的器官组织不同,要求混合气体也有所不同,通常胚胎器官宜用 5% CO2、95% 空气;成体器官常需要纯氧,或 5% CO2 与 95% O2;某些组织,如前列腺不宜在高浓度氧的条件下培养,可用 5% CO2、45% O2 和 50% N2。实验者可参考同类工作,或依据体内的生理状态预先进行预试验而定。
来源:丁香实验