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中性脂肪油红 O 显示技术

相关实验:组织学基本技术

别名:Oil red O stain

最新修订时间:

简介

中性脂肪油红 O 显示技术是利用油红 O 将中性脂肪染成红色的染色方法。

原理

中性脂肪油红 O 显示技术的基本原理是油红 O 为脂溶的着色剂,略溶于有机溶剂,不溶于水,优先为脂类溶解和吸附,属于偶氮染料,有β羟基,溶解后进行重排,成醌型结构,将中性脂肪染成红色。

材料与仪器

器材:染缸、冰冻切片等。


试剂:


① 福尔马林钙(FCa)(蒸馏水 80 ml、中性福尔马林 10 ml(福尔马林溶液的瓶底部存积约 1~2 cm 厚的碳酸钙播匀后放置室温 24 h 以上可取上清液用)、10% 氯化钙 10 ml)

② 染液(油红 O 饱和异丙醇溶液加入 1% 糊精)


③ 60% 异丙醇


④ Mayer 苏木素

⑤ 1%Na2HPO4


⑥ 蒸馏水


⑦ 甘油或甘油明胶封片(明胶 10 g 溶于蒸馏水 50 ml 中搅拌,放入 37 ℃ 的恒温箱中过夜。第二天再加入甘油 50 ml,加入约为 1% 量的麝香草酚(一小粒)搅拌,然后存放于 4 ℃ 冰箱中,用时取出,用热水温暖瓶外促其溶解即可使用。)

步骤

中性脂肪油红 O 显示技术的基本过程可分为如下几步:


A. 冰冻切片福尔马林钙固定 1 h。


B. 蒸馏水充分洗涤。


C. 60% 异丙醇 5 min。


D. 染液染色,时间 15 min。


E. 60% 异丙醇洗。


F. 蒸馏水洗。


G. 苏木素 1 min。


H. 1% Na2 HPO4 1 min。


I. 蒸馏水洗。


J. 甘油明胶封片。

注意事项

  1. 油红 O 染色时应避免试剂挥发过多,否则易形成背景沉淀。

  2. 60% 异丙醇具有分化作用,应于镜下控制至脂肪组织呈鲜红色,间质无色时为度。

来源:丁香实验

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