简介
中性脂肪油红 O 显示技术是利用油红 O 将中性脂肪染成红色的染色方法。
原理
中性脂肪油红 O 显示技术的基本原理是油红 O 为脂溶的着色剂,略溶于有机溶剂,不溶于水,优先为脂类溶解和吸附,属于偶氮染料,有β羟基,溶解后进行重排,成醌型结构,将中性脂肪染成红色。
材料与仪器
器材:染缸、冰冻切片等。
试剂:
① 福尔马林钙(FCa)(蒸馏水 80 ml、中性福尔马林 10 ml(福尔马林溶液的瓶底部存积约 1~2 cm 厚的碳酸钙播匀后放置室温 24 h 以上可取上清液用)、10% 氯化钙 10 ml)
② 染液(油红 O 饱和异丙醇溶液加入 1% 糊精)
③ 60% 异丙醇
④ Mayer 苏木素
⑤ 1%Na2HPO4
⑥ 蒸馏水
⑦ 甘油或甘油明胶封片(明胶 10 g 溶于蒸馏水 50 ml 中搅拌,放入 37 ℃ 的恒温箱中过夜。第二天再加入甘油 50 ml,加入约为 1% 量的麝香草酚(一小粒)搅拌,然后存放于 4 ℃ 冰箱中,用时取出,用热水温暖瓶外促其溶解即可使用。)
步骤
中性脂肪油红 O 显示技术的基本过程可分为如下几步:
A. 冰冻切片福尔马林钙固定 1 h。
B. 蒸馏水充分洗涤。
C. 60% 异丙醇 5 min。
D. 染液染色,时间 15 min。
E. 60% 异丙醇洗。
F. 蒸馏水洗。
G. 苏木素 1 min。
H. 1% Na2 HPO4 1 min。
I. 蒸馏水洗。
J. 甘油明胶封片。
注意事项
- 油红 O 染色时应避免试剂挥发过多,否则易形成背景沉淀。
- 60% 异丙醇具有分化作用,应于镜下控制至脂肪组织呈鲜红色,间质无色时为度。
来源:丁香实验