简介
TIL 细胞为肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltratinglymphocyte，TIL），从切除的肿瘤组织或癌性胸、腹水中分离纯化的淋巴细胞。
其肿瘤杀伤力较 LAK 细胞有明显提高，并且无需大剂量 IL-2 的联合应用，但细胞获取的问题限制了 TIL 的临床应用。
材料与仪器
器材：200 目钢网、离心机、24 孔板。
试剂：
① Hanks 液 ;
② RPMI 1640 培养液（含 0.1％ 的胶原酶、0.002％DNA 酶、0.01％ 透明质酸酶及抗生素）；
③ 10％FCS-RPMI 1640 培养液。
④ HEPES 缓冲剂
⑤ 0.04％ 锥虫蓝
步骤
TIL 细胞增殖实验的基本过程可分为如下几步，本方法以胃癌 TIL 细胞的制备为例说明其培养过程：
A 取新鲜胃癌手术标本，除去坏死组织和肿瘤表面的结缔组织，切碎，用 Hanks 液洗去血液，再加入含 0.1％ 的胶原酶、0.002％DNA 酶、0.01％ 透明质酸酶及抗生素的 RPMI 1640 培养液，在室温下搅拌过夜。
B 经 200 目钢网过滤，去除未消化的组织块，再用 Hanks 液或 RPMI 1640 洗三次，每次 1000 r/min 离心 5 分钟，制成 1x10 个/ml 左右的细胞悬液。
C 细胞悬液轻缓加在 75％—100％ 等体积不连续密度梯度淋巴细胞分层液上，1500 r/min 离心 20 分钟，分别吸取 75％ 及 100％ 分离液层面的细胞，
D 收集到的细胞分别为肿瘤细胞和 TIL 细胞，用 RPMI1640 洗 TIL 细胞三次，然后用 10％FCS-RPMI 1640 配制成 1x106 个/ml，取出 0.1 ml 细胞，用 0.04％ 锥虫蓝染色计数活细胞，最后用 24 孔板培养。
E 培养时，培养液应含 10％ 人血清、青霉素、链霉素、HEPES 缓冲剂及 L-谷氨酰胺，培养液中还需加 1000 U/ml 的 IL-2，培养 2—3 周。培养过程中观察细胞增殖速度，培养前后 TIL 表型变化。
注意事项
1. 可直接从患者活检标本、肿瘤引流的淋巴结以及胸腹水中分离，从而避免了由患者外周血制备，因此更适合体质虚弱的患者
2. TIL 细胞可长期扩增，增殖力超过 LAK 细胞，容易达到治疗所需的细胞数量；
3. TIL 细胞特异性抗肿瘤，不损害正常细胞；
4. 对 IL-2 依赖性低，免于使用大量 IL-2 带来的副作用；
5. 一般毒副作用；
6. 配合化疗，可增强 TIL 细胞的体内疗效。
7. TIL 细胞只能应用于同系动物或自体；制备复杂；与其他淋巴因子的关系以及在体内杀伤瘤细胞的机制尚待进一步研究。
来源：丁香实验
