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LAK 细胞增殖实验

相关实验:细胞因子依赖的其他免疫细胞增殖实验

最新修订时间:

简介

LAK 细胞是淋巴因子激活杀伤细胞(lymphokineactivated killer cells,LAK)的简称,1982 年 Rosenberg 等证明人外周血淋巴细胞经 IL-2 培养后,诱导出一种具有抗肿瘤高活性的杀伤细胞,后来称为淋巴因子激活的杀伤细胞,即 LAK 细胞。


LAK 细胞不需抗原刺激,就能杀伤 NK 细胞所不能杀伤的肿瘤细胞,杀伤作用不受 MHC 限制,它可杀伤同基因型,同种异体,甚至异种异体瘤细胞。

材料与仪器

器材:离心机、恒温培养箱。

试剂:

① 50 IU/ml 肝素抗凝;

② RPMI 1640 培养液 ;

③ IL-2。


步骤

LAK 细胞增殖实验的基本过程可分为如下几步:

A 首先要进行单个核细胞的分离,取外周血,加 50 IU/ml 肝素抗凝,与等量培养液 RPMI 1640 混合后加在 Ficoll 分离液的分层液面上,2000 r/min,离心 20 分钟,取中、上层交界处灰白层的单个核细胞,经 RPMI 1640 洗涤后制成细胞悬液。

B 在含 10% 小牛血清及青霉素的培养液中加 300IU/ml 的 IL-2,制备 IL-2/LAK 细胞;或加入 1:500 的 CD3 单抗及 30 IU/ml 的 IL-2,制备 CD3/LAK 细胞。

C 至培养第二周末 IL-2/LAK 细胞增长约 20 倍,CD3/LAK 增长 130 倍。加 CD3 抗体培养的 LAK 细胞,大部分为 NKT 细胞,比单纯 IL-2/LAK 细胞的细胞毒性高 6-23 倍。


注意事项

来源困难,LAK 细胞需要量大,最好在 10°以上,因此用外周血淋巴细胞经过培养达到这种数量有一定困难,此外,IL-2 需要量也大。

来源:丁香实验

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