CIGSS 法

最新修订时间：2024-05-13

原理

彩色免疫金银染色方法（coloured IGSS，CIGSS）是由 Frite 和 Hoenes 等（1986）建立的一种新方法，刘彦仿等1988）在《中华病理学杂志》上也报道了改进后的 CIGSS 方法。其基本原理是在 IGSS 法的基础上，根据洗彩色照片的显影原理而发展起来的，即 IGSS 后，在抗原位点处生成的银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的氧化反应，将银颗粒氧化成溴化银，后者与彩色显影剂起还原反应，生成金属银，而彩色显影剂本身则被氧化，其氧化产物使彩色成色剂由无色变成有色的染料，并沉积在银颗粒的部位，金属银变成了银离子。由于染料只能通过彩色显影剂沉积在有银的部位，不会发生非特异性背景染色。

材料与仪器

步骤

1. 石蜡切片常规脱蜡至水。

2. 0.1％胰蛋白酶 37℃ 消化 20 min，或抗原修复 20 min（98℃），自然冷却至室温。

3. 0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 3 × 3 min。

4. 1％EA（卵蛋白）15 min，不洗。

5. 适当稀释的特异抗体室温 4 h 或 4℃ 孵育 20 h，或 37℃ 孵育 1 h。

6. 0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 3 × 5 min。

7. 0.02 mol/L（pH 7.4）TBS（内含 0.1％ BSA）洗 10 min。

8. 1％ EA 15 min，不洗，1:10～1:20 稀释的 PAG 10 nm 室温孵育 1 h，或 37℃ 孵育 30 min。

9. 0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 10 min。

10. 1％戊二醛洗 10 min。

11. 双蒸水洗 5 min。

12. 1％明胶洗 5 min。

13. 银避光显影（见银显影剂配方）8～15 min。

14. 双蒸水洗 15 min。

15. 固定：用显影定影液（1:4 或 1:10）固定 5 min，也可以用 15％硫酸钠-20％硫代硫酸钠混合液固定 1～3 min，或用 1％戊二醛固定 5 min，温水洗 3～6 min。

16. 漂白：用 2％铁氰化钾和 1％溴化钾洗 10 min，双重蒸馏水洗 5 min。

17. 彩色显影：用萘酚或菲尼酮或碱性品红显色 2～4 min，双重蒸馏水洗 5～10 min。

18. 固定：2％硫代硫酸钠和亚硫酸钠洗 5 min。

19. 流水冲洗。

20. 缓冲甘油封片，观察。

常见问题

CIGSS 的优点：

1. 阳性结果比黑色更鲜明。

2. 可以使弱信号得到进一步放大。

3. 可部分消除 IGSS 背景染色。

4. 信号/背景比值高。

5. 是开展 IHC 双重或多重标记的新途径。

来源：丁香实验