IGS 间接法

免疫金染色（immunogold staining，IGS）法是由 Geoghegan 等（1978）首次应用金标探针检测 B 淋巴细胞表面抗原，将胶体金颗粒（大于 20 nm）标记在第二抗体或 SPA 分子上，制备成金标二抗。其原理是当特异性抗体与抗原结合后，用金标二抗或金标 SPA 与特异性抗体结合，形成抗原-抗体-金标抗体复合物，此时在光镜（10 × 100 倍）下可见红色颗粒物，即为抗原-抗体结合物。该方法特点简便、快速（因不需银显影），要求金标抗体浓度高，而且金颗粒直径大于 20 nm。<link />

1. 4 μm 石蜡切片常规脱蜡至水，0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 2 × 3 min。

2. 1％ 卵蛋白 [EA，用 0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 稀释] 温育 15 min，不洗。

3. 加入适当稀释特异性抗体，37℃ 温育 1 h，0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 2 × 3 min。

4. 0.02 mol/L（pH 7.4）TBS（内含 0～1％ BSA）洗 10 min。

5. 1％ 卵蛋白温育 15 min，不洗。

6. 适当稀释的金标记 SPA 30 nm（PAG 30 nm）室温孵育 1～2 h，0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 3 × 3 min。

7. 双重蒸馏水洗 5 min，1％ 戊二醛洗 10 min，双重蒸馏水洗 5 min。

8. 用 0.01％ 伊文斯蓝衬染 3 min，50％ 缓冲甘油封片。

9. 结果观察：阳性呈现红色细颗粒状。

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