原理
ABPAP 法是 PAP 法和 ABC 法的联合应用，使更多的酶分子结合到抗原-抗体复合物上，目的就是增加方法的敏感性。其原理见图 4-11。作者应用了 30 余种特异性一抗、鼠源性和兔源性 PAP 复合物以及 ABC 检测系统，结果 ABPAP 法比单一的 PAP 法要敏感 7～8 倍，比单一的 ABC 法要敏感 1～4 倍。
材料与仪器
石蜡切片 ABC 复合物 PAP 复合物 动物血清
蛋白酶 特异性一抗 桥抗体 PBS DAB H2O2
滴管 玻片
蛋白酶 特异性一抗 桥抗体 PBS DAB H2O2
滴管 玻片
步骤
1. 4 μm 石蜡切片 58℃ 烤片 4 h，切片常规脱蜡至水，PBS 洗 3 min×3 次。
2. 蛋白酶消化或 AR（组织抗原的暴露或抗原的修复，此步视情况而定）。
3. 0.3％ H2O2 处理切片 20 min（室温），PBS 洗 3 min × 2 次。
4. 3％ 正常动物血清处理切片 30 min（室温），吸去多余血清，不洗。
5. 适当稀释的特异性一抗孵育（4℃ 过夜或 37℃ 60 min），PBS 洗 3 min × 3 次。
6. 滴加桥抗体（二抗），37℃ 孵育 30 min，PBS 洗 3 min × 3 次。
7. 适当稀释的 PAP 复合物（要求与特异性一抗同一种属）37℃ 孵育 30 min。
8. PBS 洗 3 min × 3 次。
9. 适当稀释的生物素化羊抗兔或抗鼠二抗（根据 PAP 复合物种属而选择不同的二抗）37℃ 孵育 30 min，PBS 洗 3 min × 3 次。
10. 适当稀释 ABC 复合物 37℃ 孵育 30 min，PBS 洗 3 min × 3 次。
11. 0.04％ DAB-0.03％ H2O2 显色 8～12 min。
12. 水洗、复染、脱水、树胶封片，观察结果。
来源：丁香实验
