原理
材料与仪器
组织标本
无菌DMEM F12 50:50 加人1.2 mg ml重碳酸盐 CMD3培养基 胶原酶 900 IU ml Vitrogen 解剖刀 培养瓶 25cm2 Vitrogen包被 8μg cm2
摇床 离心管
无菌DMEM F12 50:50 加人1.2 mg ml重碳酸盐 CMD3培养基 胶原酶 900 IU ml Vitrogen 解剖刀 培养瓶 25cm2 Vitrogen包被 8μg cm2
摇床 离心管
步骤
(a)手术后，立即将组织标本转移至DMEM/F12(1:1)。
(b)用两把解剖刀（每只手一把）将组织剪成约2 mm的小块。
(c)置摇床上（60 r/min)，37℃,胶原酶消化24〜48h。
(d)离心消化物数秒钟，175g，脂肪和富含脂质的细胞漂浮于上清液的上方，将其弃去；上清液中主要含有血管来源的小粒和单个细胞；沉淀中含有血管和上皮来源的较大组织样颗粒。
(e)用10ml DMEM/F12重悬沉淀。在30s内，上皮来源的组织样大颗粒会沉淀，血管来源部分则悬浮于培养基中。因为它们最终也会沉淀下来，所以应该同上皮来源的组织样大颗粒分离。通常，再经过两轮重悬沉淀，就可以将上皮来源的组织样大颗粒与血管分离。
(f)离心d步骤中的上清液，125g,5 min。沉淀中含有小血管。弃去上清，离心，500g,10 min,则沉淀中含有成纤维细胞。
(g)将上皮来源的小粒，种植到Vitrogen包被的25cm2培养瓶中。必要时，其他部分也可种植。
(h)加人CDM3培养基，培养瓶置于37℃，5% CO2温箱中
来源：丁香实验
