IrECM三维培养乳腺干细胞

(a)在I型胶原包被的培养瓶中用H14培养基培养D920细胞至70%〜80%汇合。

(b)消化细胞，用DMEM/0.5FB/EDTA重悬至l×10⁷个细胞/ml。

(c)加人1:50稀释的抗ESA抗体，置冰上孵育30 min。

(d)用10ml无血清的DMEM洗涤一遍，然后用DMEM/0.5FB/EDTA重悬至1×10⁷个细胞/ml。

(e)按照制造商推荐的浓度，加人抗鼠IgG磁珠，置冰上孵育30 min。

(f)用10 ml无血清的DMEM洗涤一遍，然后用DMEM/0.5FB/EDTA重悬至1×10⁷个细胞/ml。

(g)将细胞悬液加人到合适体积的MACS柱中。

(h)用3倍细胞悬液体积的DMEN/0.5FB/EDTA培养基洗涤MACS柱。

(i)从磁铁上取下柱子，用H14培养基洗脱。

(j)将基底膜基质（Matrigel)置于冰上，在24孔板中每孔加人5μL包被。

(k)置37℃，10 min使之聚合。

⑴与此同时，用300μ1冰浴的Matrigel重悬1×10³〜1×10⁴的D920细胞。

(m)加人到包被的24孔板中，置37℃,10 min使之聚合。

(n)加入H14培养基，每2天换液。