乳腺干细胞的培养实验

细胞实验

最新修订时间：2023-03-07

简介

乳腺干细胞的存在位置和生物化学特性很复杂，部分原因是人们发现将乳腺的任何一个部分移植到去除上皮的乳腺脂肪垫中，均可以再生完整的乳腺。用逆转录病毒插入标记的方法，证明小鼠乳腺可以由单个细胞生成。最近，有两项研究在单细胞水平上明确证明小鼠体内，去除表达造血谱系标志物的细胞后，CD29⁺/CD24⁺，或CD49f⁺/CD24⁺的乳腺上皮细胞群体中富含具有克隆能力的细胞，可以在去除上皮的脂肪垫中定植并形成可产生乳汁的双膜乳腺。更为重要的是这种经克隆形成的乳腺可以连续移植到新的宿主，表明干细胞具有自我更新的能力。来源：《人干细胞培养》

来源：丁香实验

操作方法

乳房缩小整形术组织标本中上皮细胞的制备

(a)手术后，立即将组织标本转移至DMEM/F12(1:1)。(b)用两把解剖刀（每只手一把）将组织剪成约2 mm的小块。(c)置摇床上（60 r/min)，37℃,胶原酶消化24〜48h。(d)离心消化物数秒钟，175g，脂肪和富含脂质的细胞漂浮于上清液的上方，将其弃去；上清液中主要含有血管来源的小粒和单个细胞；沉淀中含有血管和上皮来源的较大组织样颗粒。(e)用10ml DMEM/F12重悬沉淀

IrECM三维培养乳腺干细胞

(a)在I型胶原包被的培养瓶中用H14培养基培养D920细胞至70%〜80%汇合。(b)消化细胞，用DMEM/0.5FB/EDTA重悬至l×107个细胞/ml。(c)加人1:50稀释的抗ESA抗体，置冰上孵育30 min。(d)用10ml无血清的DMEM洗涤一遍，然后用DMEM/0.5FB/EDTA重悬至1×107个细胞/ml。(e)按照制造商推荐的浓度，加人抗鼠IgG磁珠，置冰上孵育30 min