原理
材料与仪器
完整的人角膜
CMF-SalineG 胰蛋白酶 EDTA DMEM F-12 GASP DMEM F-12 2FB:DMEM:Ham’sF-12 1:1 含2%FBS CMF GASP
手术刀或单刃安全刀片 弯虹膜剪 11cm(4-3 8 in.) Jeweler’s慑子 10cm(4 in.) 角膜剪 19mm刃 尖头 Colibri缝线钳0.1 mm
CMF-SalineG 胰蛋白酶 EDTA DMEM F-12 GASP DMEM F-12 2FB:DMEM:Ham’sF-12 1:1 含2%FBS CMF GASP
手术刀或单刃安全刀片 弯虹膜剪 11cm(4-3 8 in.) Jeweler’s慑子 10cm(4 in.) 角膜剪 19mm刃 尖头 Colibri缝线钳0.1 mm
步骤
(a)用PBSA将角膜清洗3次，每次5 min。
(b)剪除残留的巩膜，结膜和虹膜。
(c)加人2 ml 1.2 U/ml中性蛋白酶II，4℃过夜，轻微搅动。
(d)将加人中性蛋白酶II的角膜放人4℃摇床摇30 min。
(e)用DMEM/F-12/GASP清洗角膜。
(f)解剖显微镜下，小心去除小梁网，剥离内皮层并用胰蛋白酶/EDTA消化37℃，30 min。
(g)加入同等体积的DMEM/F-12/2FB并拍散细胞。
(h)离心400g,10 min,弃去上清。
(i)加人1 ml培养基，轻柔的重悬细胞并计数。
来源：丁香实验
