分离和培养人角膜内皮细胞实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

来源：《人干细胞培养》

来源：丁香实验

操作方法

分离人角膜内皮细胞

(a)用PBSA将角膜清洗3次，每次5 min。(b)剪除残留的巩膜，结膜和虹膜。(c)加人2 ml 1.2 U/ml中性蛋白酶II，4℃过夜，轻微搅动。(d)将加人中性蛋白酶II的角膜放人4℃摇床摇30 min。(e)用DMEM/F-12/GASP清洗角膜。(f)解剖显微镜下，小心去除小梁网，剥离内皮层并用胰蛋白酶/EDTA消化37℃，30 min。(g)加入同等体积的DMEM/F-12/2FB

角膜内皮细胞的常规培养

(a)将细胞接种于包被有FNC的6孔板中。(b)每3天换液一次。(c)当细胞90%汇合时用胰蛋白酶消化传代。

培养内皮细胞球

(a)胰蛋白酶消化细。(b)将分离出的细胞用培养基以10个细胞/μL的密度重悬，并接种于未经组织培养处理的24孔板中。(c)7天后用胰蛋白酶消化细胞并离心收集细胞，继续接种。