材料与仪器
细胞质提取物
10× 细胞质提取缓冲液
Beckman 50型固定角转子或相当的转子
10× 细胞质提取缓冲液
Beckman 50型固定角转子或相当的转子
步骤
1) 仔细测量细胞质提取物的体积(见基本方案步骤 7 中的上清)。加入 0.11 倍体积的10×细胞质提取缓冲液,充分混合。
2)100 000 g 离心 1 h。
3)将上清(± 100) 装入透析管中进行透析,直至与S-100 的电导率达到与透析缓冲液一致(100 mmol/L KCL)。
4)从透析管移出上清(±100),25000 g 离心 20 min,以收集沉淀组分。
5)轻轻倒出上清,检测其电导率并测定蛋白质浓度。分装入小管中,液氮中快速冷冻,-80℃保存。
来源:丁香实验