材料与仪器
转瓶或单层培养的哺乳动物细胞（如HeLa细胞）
高盐缓冲液 分别含 0.8、1.0、1.2、1.4 及 1.6 mol L KCl
贝克曼 JS4. 2 转子或相当的转子 50 mL 圆锥形刻度聚丙烯离心管（对较小体积的提取物也可用 15 mL 的离心管） Dounce 氏玻璃匀浆器（B 型研杵） Beckman JA-20 离心转子或相当的转子磁性搅拌器或倾斜台 管型透析膜（14000 MWCO） 电导计
高盐缓冲液 分别含 0.8、1.0、1.2、1.4 及 1.6 mol L KCl
贝克曼 JS4. 2 转子或相当的转子 50 mL 圆锥形刻度聚丙烯离心管（对较小体积的提取物也可用 15 mL 的离心管） Dounce 氏玻璃匀浆器（B 型研杵） Beckman JA-20 离心转子或相当的转子磁性搅拌器或倾斜台 管型透析膜（14000 MWCO） 电导计
步骤
1) 按基本方案中步骤1〜8操作。
2) 在低盐缓冲液中重悬细胞核后（1/2体积pnv，见基本方案步骤8)，将细胞核悬液分成5等份。
3) 在冷室内不断搅拌，按如下方法在每份悬液中加入1/3体积高盐缓冲液：在第1份 中加KCl浓度最低（0.8 mol/L)的高盐缓冲液，其余各份中依次加入KCl浓度逐 渐增高（直到1. 6 mol/L)的高盐缓冲液。
4) 确定在离心管斜面上有提取出的细胞核，轻轻混合30 min。
5) 25000 g离心30 min,除掉核。
6) 将上清轻轻倒出，进行透析（见基本方案步骤12)，直到加KCl浓度最高的那份核悬液的电导率达到与透析液一致（100 mmol/L KCl)。提取物25000 g离心20 min。
7) 检测各份提取物的电导率并测定蛋白质浓度（见基本方案步骤13和14)。
8) 直接分析提取物或分装到试管中，在液氮中速冷后放入-80℃保存。
来源：丁香实验
