淋 巴 细 胞 脉 络 丛 脑 膜 炎 病 毒 感 染 动 物 模 型

 

基 本 方 案 1 全 身 性 感 染 LCM V 小鼠模型

材 料

已知滴度的 L C M V 病 毒 株（见辅助方案 1 和 2)

P B S

适当品系小鼠，满足统计学意义所需的数量。

麻 醉 剂（如氯胺酮/甲苯噻嗪；附 录 2D )

1 ml Luer打锁紧套口注射器（一次性注射器）， 25G〜 27G针 头

I. 37°C 水浴融化病毒冻存液后立即置于冰上，采用以下方法感染动物后应该依照生物安全标准舍弃不可用的病毒冻存液，不可反复冻融。

腹腔内注射感染

依照上述方法将 IO〜I O ⁶ P f i I 的 L C M V 腹腔注入小鼠体内，引起除脑之外的全身性感染，但病毒通常在感染 7〜I O d 内 被 清 除 ，大剂量注射会导致体内免疫耗竭而延迟病毒的清除。

2a. 稀释病毒溶液，注意控制注入每个小鼠体内的体积在 0.1〜0.2m l 。

3a. 用 I m l 注射器吸取所需量的病毒液，之后再装上 25 G 〜27 G 针头，冰上保存待用。

注意：不要用盖上针头的注射器吸病毒液，不符合安全要求。

4a. 小鼠腹膜内注射病毒液（附 录 2E )。

尽 管 没 有 规 定 实 验 开 始 之 前 必 须 进 行 麻 醉 ，但 是 出 于 安 全 的 考 虑 ，建 议 对 所 要操 作 的 动 物 进 行 麻 醉 。

静脉注射

如果希望快速建立全身性病毒感染及建立宿主免疫抑制和持续感染，需通过静脉注射（IO〜10⁵pfu) L C M V 病毒，才可引发小鼠的全身性感染。但 若 大 于 IO5 会导致持续 的 感 染 或 「耗竭」免疫反应。

2b. 稀释病毒溶液，控制注入小鼠静脉内的体积在0.05〜0.1m l 。

3b. 用 I m l 注射器吸取所需量的病毒液，之后再装上 27 G 针头，冰上保存待用。

4b. 小鼠静脉内注射病毒液（附 录 2E )。

足垫接种和皮下注射感染

足垫接种和皮下注射的剂量和产生的结果相似。足垫接种时，只 需 要 I O 2 P f u 的L C M V 就可引起小鼠全身性感染，病毒溶液通过局部淋巴结迅速扩散并引起较强的抗病毒免疫反应，其特征为足垫肿胀。

2c. 稀释病毒溶液，控 制 注 入 小 鼠 静 脉 内 的 体 积 在 0.1〜0.2 ml (皮下）或 10〜50ul(足垫）。

3c. 用 I m l 注射器吸取所需量的病毒液，之后再装上 25 G 〜27 G 针 头 ，冰上保存待用。

4c. 小鼠足垫接种和皮下注射毒液（附 录 2E )。

颅内接种

腹腔注射、静脉注射、足垫接种和皮下注射往往不产生脑内感染。然 而 ，直接颅内接种导致大脑和脉络丛脑膜炎后， 9 8 % 〜1 0 0 % 的小鼠在感染后 6〜9d 死于脉络丛脑膜炎（病毒由此而得名）。致死原因是机体产生抗 L C M V 病毒的免疫病理反应而非病毒对细胞的直接病理作用（Dixon ， 1987)。对 L C M V 已产生免疫力的动物，颅内感染可以大大减少免疫病理反应，而提高动物的存活率（见基本方案 4 中 L C M V 接种）。故
颅内注射的方法常用于疫苗研究及抗病毒免疫效果评估。

2d. 稀释病毒溶液，控制注入小鼠颅内最大注射体积 50ul 中 含 1〜50pfu 的病毒。

3d. 用 I m l 注射器吸取病毒溶液，之后再装上 27 G 针头，冰上保存待用。

4d. 氯胺酮/甲苯噻嗪麻醉小鼠（附 录 2D )。

5d. 注意进针深度，用刀片切割针帽，使 针 尖 距 针 帽 2m m 左右 ，安装帽时特别注意，因为针头已沾有病毒溶液。

6d. 四指固定小鼠头部，从眼眶近背部进针 5m m 入 颅 内（此处为骨联合处，进针深度容易控制）慢进慢出，大 约 5m i n 后小鼠从麻醉中苏醒过来，每天进行观察， 5〜9d之内不更换饲养笼。

每 一 个 病 毒 株 都 要 仔 细 地 测 定 L D 5。滴 度 。

基 本 方 案 2 LCM V 病毒持续感染小鼠模型

材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)

已知滴度的 L C M V 病 毒 株（见辅助方案 1 和 2)

P B S

怀孕小鼠

Iml —次性注射器， 27 G 针头

1 . 监控怀孕小鼠直到生产。

2 . 新生小鼠出生 24 h 内，腹腔接种 30W 含 IO3 Pfu 病 毒 的 P B S 液（基本方案 1)。

3 . 小鼠生长至 4 周时，用血清空斑形成试验检测小鼠血清以证实持续感染成功（见辅助 方 案 2)。

持 续 感 染 成 熟 小 鼠 ，可 使 病 毒 通 过 胎 盘 传 染 给 胎 儿 以 获 得 持 续 感 染 的 小 鼠 ，但这 样 要 花 费 大 量 的 时 间 寻 找 符 合 要 求 的 成 鼠 ，而 且 喂 养 小 鼠 也 需 要 在 达 到 B L -2 级的实 验 室 中 进 行 。 另 外 免 疫 抑 制 的 小 鼠 也 可 用 来 做 持 续 感 染 的 动 物 模 型基 本 方 案 3 T 细 胞 对 LCM V 免疫反应的测定