杂交瘤或细胞系细胞的大规模制备

附 加 材 料（其 他 材 料 见备选方案 1 )

PBS, 4°C

1.增 殖 杂 交 瘤（见备选方案 1 ，步 骤 1〜4)，但与之前不同的是，当细胞生长密度适中或处于稳定生长期时停止培养。根据所需细胞数量配置多个 175 cm2 培 养 瓶（每个培养瓶可盛 2. 4L 培养基，每毫升培养基可生产数量级为 IO₆ 的细胞）。将每个培养瓶作为独立的单位进行培养。肉眼观察培养基颜色和混浊度，并每天对每个培养瓶进行细胞计数和成活率检测，及时停止细胞培养，以免细胞过度增殖。

2.将细胞倒入无菌的 250 ml 锥底离心管， 4°C ， 250 g 离 心 15 min，弃上清。每个离心管可 连 续 2 次离心细胞。

3.将细胞沉淀置于冰面上。每 10 个沉淀合并入一个离心管，用 250 ml 4°C PBS 重悬细胞 。 4°C ， 250 g 离 心 15 min，弃上清。重复上述步骤，并进一步将多个离心管的沉淀移入一个离心管。洗 涤 3 次 ，进一步处 理 细 胞（如细胞裂解、核素标记等）。也可以3 次洗涤较小的细胞沉淀物后进一步处理细胞。