方案7 用羟胺切割 Asn-Gly 键实验

1.将蛋白质直接溶解于切割缓冲溶液中，终浓度为 5 mg/ml。

2.混合物在 45°C 孵育 4 h。

3.冷却样品以终止反应，加人浓缩后的蚁酸 [或 3 倍体积的 2%(体积分数）TFA 水溶液]，调整 pH 为 2.5。

4.通过层析使样品在柱子上脱盐。通过液相层析立刻分析肽段混合物，或者储存样品在-20°C 以备以后分析。

5.如果利用凝胶电泳进行分析，反应可自行终止（见步骤③）而无需酸化，但需加人 SDS-PAGE 样品缓冲液。