材料与仪器
冻干的蛋白质
切割缓冲溶液 甲酸 三氟乙酸
层析柱 液相层析装置 磁力搅拌盘 聚丙烯试管 水浴箱
切割缓冲溶液 甲酸 三氟乙酸
层析柱 液相层析装置 磁力搅拌盘 聚丙烯试管 水浴箱
步骤
1.将蛋白质直接溶解于切割缓冲溶液中,终浓度为 5 mg/ml。
2.混合物在 45°C 孵育 4 h。
3.冷却样品以终止反应,加人浓缩后的蚁酸 [或 3 倍体积的 2%(体积分数)TFA 水溶液],调整 pH 为 2.5。
4.通过层析使样品在柱子上脱盐。通过液相层析立刻分析肽段混合物,或者储存样品在-20°C 以备以后分析。
5.如果利用凝胶电泳进行分析,反应可自行终止(见步骤③)而无需酸化,但需加人 SDS-PAGE 样品缓冲液。
来源:丁香实验