材料与仪器
组织提取物
GUS 缓冲液 MUG
96 孔板 数显荧光计
GUS 缓冲液 MUG
96 孔板 数显荧光计
步骤
1. 分别取 25 ul 和 50 ul 组织提取物样品于 96 孔板中（黑色或者白色），包括未转化的对照组织，加 GUS 缓冲液至总体积为 200 ul，混匀。
2. 加入 100 μl 含 2.5 mg/ml MUG（终浓度为 2 mmol/L ) 的 GUS 缓冲液以开始反应，混匀，加盖。
3. 37℃ 温浴，反应 5~10 min。取 50 μl 反应液加入另一个含有 200 ul 0.2 mol/L Na2CO3的微型板中，以终止反应。然后按照合适的时间间隔（10 min、20 min、30 min 或 1 h ) ，再取 50 ul，进行相同的操作。
4. 在 365 nm 的激发光、455 nm 的发射光下，用数显荧光计测量 MU 产物的荧光量。检测样品产生的线性动力学关系，蛋白提取物稀释值及重复测量的荧光量是否相对应。
5. GUS 活性可以用 pmolMU / min / mg 蛋白来表示。其中 MU 标准物按照荧光读数器线性关系的浓度（如 0~5 umol/L )，通过 0.2 mol/L 的Na2CO3溶液稀释，并置于板上。1 mmol/L 的 MU 甘油溶液应 4℃ 保存，使用前检测有无 Na2CO3的沉淀。
或者，荧光活性也可以用荧光单位（flu) / ng 蛋白/min 表示。要把这个值转化为 UidA 蛋白的量，需要用纯化的 GUS 酶（E.coli VII- A，Sigma ) 绘制标准曲线：用 GUS 缓冲液稀释 GUS 酶至 0.1 ng/ul 的工作浓度，在总体积为 50 ul 的 GUS 缓冲液中加入 0~2 ng 的 GUS 酶，按照上面的步骤进行分析。
6. 有些植物组织含有高水平的内源性 GUS 活性，但可以优化反应条件来检测这些组织的 GUS 活性。
2. 加入 100 μl 含 2.5 mg/ml MUG（终浓度为 2 mmol/L ) 的 GUS 缓冲液以开始反应，混匀，加盖。
3. 37℃ 温浴，反应 5~10 min。取 50 μl 反应液加入另一个含有 200 ul 0.2 mol/L Na2CO3的微型板中，以终止反应。然后按照合适的时间间隔（10 min、20 min、30 min 或 1 h ) ，再取 50 ul，进行相同的操作。
4. 在 365 nm 的激发光、455 nm 的发射光下，用数显荧光计测量 MU 产物的荧光量。检测样品产生的线性动力学关系，蛋白提取物稀释值及重复测量的荧光量是否相对应。
5. GUS 活性可以用 pmolMU / min / mg 蛋白来表示。其中 MU 标准物按照荧光读数器线性关系的浓度（如 0~5 umol/L )，通过 0.2 mol/L 的Na2CO3溶液稀释，并置于板上。1 mmol/L 的 MU 甘油溶液应 4℃ 保存，使用前检测有无 Na2CO3的沉淀。
或者，荧光活性也可以用荧光单位（flu) / ng 蛋白/min 表示。要把这个值转化为 UidA 蛋白的量，需要用纯化的 GUS 酶（E.coli VII- A，Sigma ) 绘制标准曲线：用 GUS 缓冲液稀释 GUS 酶至 0.1 ng/ul 的工作浓度，在总体积为 50 ul 的 GUS 缓冲液中加入 0~2 ng 的 GUS 酶，按照上面的步骤进行分析。
6. 有些植物组织含有高水平的内源性 GUS 活性，但可以优化反应条件来检测这些组织的 GUS 活性。
来源：丁香实验
