HeLa细胞细胞核或核仁的制备

HeLa细胞
PBS
Teflon-玻璃匀浆器

1. 准备溶液：

PBS

RSB-8 10 mmol/L Tris；10 mmoI/L NaCl，8 mmoI/L 乙酸镁，pH 7.4

RSB 10 mmol/L Tris；10 mmol/L NaCl，1.5 mmol/L 乙酸镁，pH 7.2

0.88 mol/L 蔗糖，5.0 mmol/L 乙酸镁

0.34 mol/L 蔗糖，0.5 mmol/L 乙酸镁

0.88 mol/L 蔗糖

2. 800 g 离心 8 分钟收获转瓶培养的对数生长期 HeLa 细胞（0.5 X 10⁹）。

3. 早带宽松 Teflon 研棒的 Teflon-玻璃匀浆器中，用马达推动进行温和匀浆将细胞沉淀重悬浮于冰冷的 PBS 中，800 g 离心 8 分钟。

4. 重复 PBS 清洗步骤，称取细胞沉淀的重量。

5. 温和匀浆使细胞悬浮于 20 倍体积的 RSB-8 中。冰水放置 30 分钟使细胞膨胀。

6. 1000 g 离心膨胀的细胞 8 分钟。

7. 温和匀浆使细胞重悬浮于加有 0.05 倍体积 10% NP-40 的 RSB 缓冲液中。NP-40 的终浓度为 0.5%。

8. 用带宽松研棒的 Dounce 匀浆器匀浆 20~60 次直到细胞破裂释放出不带细胞质的细胞核。

9. 800 g 离心 8 分钟。吸出上清。

10. 进行温和匀浆将细胞核粗品重悬浮于含 0.88 ml/L 蔗糖和 5.0 mmol/L 乙酸镁的溶液中（20 ml/g 细胞）。2500 g 离心 20 分钟。吸出上清。

11. 温和匀浆将细胞核沉淀悬浮于含 0.34 mol/L 蔗糖和 0.5 mmol/L 乙酸镁的溶液中。

12. 用注射器或吸管将样品转移至一在冰水中放置的菊花状超声振荡头中。

13. 细胞核悬液进行 10 秒钟超声处理（10~20 秒的冷却间隔）。总的处理时间在 60~110 秒之间。

14. 超声处理物下加一层 3~4 倍体积的 0.88 mol/L 蔗糖溶液（不含乙酸镁），3000 g 离心 20 分钟。