线粒体和细胞核的制备与观察
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实验原理
利用细胞核与线粒体在一定介质中的沉降速度的差异，可采取分级差速离心的方法，将细胞核与线粒体逐级分离出来（差速离心技术）。
细胞器标记酶的测定是评价细胞器内膜组分和分离纯度的主要依据，如线粒体内膜上分布有细胞色素氧化酶，该酶使詹纳斯绿B染料保持在氧化状态呈现蓝绿色，从而使线粒体显色，而胞质中的染料被还原成无色。
Gimesa是一种复合染料，即为酸性染料与碱性染料的结合物。在水溶液中电离为带正电和负电的染料离子。
实验试剂
1. 0.25mol/L蔗糖-0.01mol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)-盐酸缓冲液(pH7.4)
2. 0.34mol/L蔗糖-0.01mol/LTris-盐酸缓冲液（pH7.4），配法同上。
3. 1%詹纳斯绿B(Janus green B)染液，称取50mg（pH7.4），詹纳斯绿B溶于5ml生理盐水中，稍微加热使之溶解后，过滤，即为1%原液。
5. 1/15 mol/L磷酸缓冲液（pH6.8）：1/15 mol/ L磷酸二氢钾50 ml，1/15 mol/ L磷酸氢二钠50 ml。
6. 卡诺（Cornay）固定液：无水乙醇6 ml冰醋酸1 ml氯仿3 ml。
实验设备
实验材料
实验步骤
2. 差速离心：将0.34 mol/ L 蔗糖溶液4.5 ml放入离心管，然后沿管壁小心地加入4.5 ml鼠肝匀浆覆盖于上层。用冷冻控温的高速离心按下图顺序进行差速离心。
1) 细胞核：将干燥后的三张涂片加入Carnoy固定液15min，晾干。Giemsa染液染10min，蒸馏水漂洗数秒，用滤纸吸干水，用显微镜（40×）检查，细胞核呈紫红色，混杂的细胞质为浅蓝色碎片。
2) 线粒体：取线粒体沉淀滴在载玻片上，勿太密。滴加 1%詹纳斯绿溶液染色，10分钟后用光学显微镜观察，线粒体呈蓝绿色，小棒状或哑铃状。
注意事项
试验全过程要在0～4℃进行，如果使用非冷冻控温的离心机一般只宜分离细胞核和线粒体，同时注意使样品保持冷冻；尽可能充分破碎组织，缩短匀浆时间。整个分离过程不宜过长。
