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线粒体电镜照片观察实验

相关实验:线粒体电镜照片观察实验

最新修订时间:

原理

线粒体是细胞内一种重要细胞器,一个细胞中线粒体的数目、形状和大小常因细胞和生理状况等不同而有较大的差别。通过詹纳斯绿 B 专一性线粒体染色剂染成蓝绿色,然后在电镜下观察。

材料与仪器

詹纳斯绿 B 染液,Ringer 氏液,电镜,载玻片,盖玻片,细胞培养皿,镊子

步骤

1、取需要观察的组织,放入盛有 Ringer 氏液的细胞培养皿内,用镊子轻压洗去血液。

2、去除 Ringer 氏液,加入覆盖组织的詹纳斯绿 B 染液,组织块上表面露在空气中,染色 30 分钟。

3、将组织块移到载玻片上,用镊子拉碎,去掉大块组织,使游离细胞或细胞群留在载玻片上,加一滴 Ringer 氏液,盖上盖玻片,吸去多余水分。

4、培养的细胞可直接固定后,加入詹纳斯绿 B 染液染色 30 分钟后观察。

5、电镜下观察细胞线粒体数目,大小,形状等。不同细胞中线粒体的形态和数目不同。线粒体的外形多样,如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关,线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。

线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。一般与线粒体长轴垂直排列,但也可见到与线粒体长轴平行排列的脊。脊的横切面呈囊状或管状。脊的数量与细胞呼吸机能的强度有很大关系。

注意事项

在使用透视电子显微镜观察生物样品前样品必须被预先处理。随不同研究要求的需要科学家使用不同的处理方法。

固定:为了尽量保存样本的原样使用戊二醛来硬化样本和使用锇酸来染色脂肪。

冷固定:将样本放在液态的乙烷中速冻,这样水不会结晶,而形成非晶体的冰。这样保存的样品损坏比较小,但图像的对比度非常低。

脱干:使用乙醇和丙酮来取代水。

垫入:样本被垫入后可以分割。

分割:将样本使用金刚石刃切成薄片。

染色:重的原子如铅或铀比轻的原子散射电子的能力高,因此可被用来提高对比度。

来源:丁香实验

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