材料与仪器
肝脏
乙醚 蔗糖 TES Na4EDTA PMSF 亮抑酶肽
聚四氟乙烯研杵
乙醚 蔗糖 TES Na4EDTA PMSF 亮抑酶肽
聚四氟乙烯研杵
步骤
1. 用乙醚或其他麻醉剂使麻醉，采用断头法处死。
2. 迅速取出肝脏，称重，置于冰上的重铝箔上使之迅速冰冷。
3. 用剪刀将肝脏组织剪成碎片并转移到一只冰冷的 Potter-EIvjhem 匀浆器管中加入三倍体积（ml/g 组织）的冷的匀浆缓冲液。
匀浆缓冲液（含有 0.1% 乙醇的蔗糖（0.25 mol/L)，10 mmol/L TES，pH 7.5，1 mmoI/L Na4EDTA，PMSF 和亮抑酶肽）
4. 用一只旋转、马达驱动（1500 r/min ) 的聚四氟乙烯研杵往复捣碎一次，使绀织匀浆化，应确信使所有的组织都通过研杵和玻璃管。
5. 将匀浆液在一只角度转头中以 1000 g ( 在 Sorvall SS-34 转头中为 3000 r/min ) 离心 10 分钟（4℃）。
6. 轻轻倒出上清（S-1）并保存，再用 3 倍体积的匀浆缓冲液（mg/ml 组织）将沉淀进行匀浆，在匀浆器中往复捣碎一次。
7. 将匀浆液于 600 g（在 SS-34 转头中 2250 r/min）离心 10 分钟。
8. 将上清与笫一次的合并；如前所述用三倍体积的匀浆缓冲液对沉淀进行再次匀浆 ，然后以 600 g 离心 10 分钟。
9. 上清与前面合外后的 S-1 再作合并，加入 2 ml PMSF，沉淀（粗的细胞核组分） 则弃去。
10. 将合并后的上清于 3300 g（SS-34 转头中 5250 r/min ) 离心 10 分钟，倒出上清并保留（S-2）。将沉淀重悬于大约相当于最初缓冲液的三分之一体积的匀浆缓冲液中，然后用一只 50 ml 的 Poller-Elvjhem 匀浆器进行匀浆处理。
11. 将匀浆液于 3300 g 离心 10 分钟。
12. 将上清与前面的合并后的 S-2 相合并，加入 2 ml 的 PMSF，然后弃去沉淀（粗制线粒体部分）。
13. 将合并的上清以 25000 g ( 在 SS-34 转头中为 14500 r/min ) 离心 10 分钟。
14. 倒出上清，将最后的 1~2 ml 摇晃以尽可能地除去沉淀上层松软的粉红色部分，同时又不影响下层比较结实的沉淀。弃去上清（S-3）。用相当于原来体积（S-2）三分之一的匀浆缓冲液以手使剩余的部分（轻线粒体或 L 部分）匀浆。
15. 将匀浆液于 25000 g 再离心 10 分钟。弃去上清。
16. 轻轻地将沉淀重悬于与起始肝脏重量相等体积（ml/g）的匀浆缓冲液中。
17. 10 ml 30% 的 Accudenz 溶液至一只 40 ml 的超速离心管中（polycarbonate，直径 = 2 cm，Beckman 340382)， 然后轻轻地将2 ml 重悬的 L 组分铺在 Accudenz 溶液上，盖上管子，以 45000 g（在 Beckman Ti 50.2 转头中为 25000 r/min）离心 15 分钟。
18. 吸出界面物质，接着吸出上清。将沉淀重悬于相当于 1/4 肝脏重量的 Accudenz 介质中（或者悬于匀浆缓冲液中）。这就是最终的过氧化物酶体制备物。
2. 迅速取出肝脏，称重，置于冰上的重铝箔上使之迅速冰冷。
3. 用剪刀将肝脏组织剪成碎片并转移到一只冰冷的 Potter-EIvjhem 匀浆器管中加入三倍体积（ml/g 组织）的冷的匀浆缓冲液。
匀浆缓冲液（含有 0.1% 乙醇的蔗糖（0.25 mol/L)，10 mmol/L TES，pH 7.5，1 mmoI/L Na4EDTA，PMSF 和亮抑酶肽）
4. 用一只旋转、马达驱动（1500 r/min ) 的聚四氟乙烯研杵往复捣碎一次，使绀织匀浆化，应确信使所有的组织都通过研杵和玻璃管。
5. 将匀浆液在一只角度转头中以 1000 g ( 在 Sorvall SS-34 转头中为 3000 r/min ) 离心 10 分钟（4℃）。
6. 轻轻倒出上清（S-1）并保存，再用 3 倍体积的匀浆缓冲液（mg/ml 组织）将沉淀进行匀浆，在匀浆器中往复捣碎一次。
7. 将匀浆液于 600 g（在 SS-34 转头中 2250 r/min）离心 10 分钟。
8. 将上清与笫一次的合并；如前所述用三倍体积的匀浆缓冲液对沉淀进行再次匀浆 ，然后以 600 g 离心 10 分钟。
9. 上清与前面合外后的 S-1 再作合并，加入 2 ml PMSF，沉淀（粗的细胞核组分） 则弃去。
10. 将合并后的上清于 3300 g（SS-34 转头中 5250 r/min ) 离心 10 分钟，倒出上清并保留（S-2）。将沉淀重悬于大约相当于最初缓冲液的三分之一体积的匀浆缓冲液中，然后用一只 50 ml 的 Poller-Elvjhem 匀浆器进行匀浆处理。
11. 将匀浆液于 3300 g 离心 10 分钟。
12. 将上清与前面的合并后的 S-2 相合并，加入 2 ml 的 PMSF，然后弃去沉淀（粗制线粒体部分）。
13. 将合并的上清以 25000 g ( 在 SS-34 转头中为 14500 r/min ) 离心 10 分钟。
14. 倒出上清，将最后的 1~2 ml 摇晃以尽可能地除去沉淀上层松软的粉红色部分，同时又不影响下层比较结实的沉淀。弃去上清（S-3）。用相当于原来体积（S-2）三分之一的匀浆缓冲液以手使剩余的部分（轻线粒体或 L 部分）匀浆。
15. 将匀浆液于 25000 g 再离心 10 分钟。弃去上清。
16. 轻轻地将沉淀重悬于与起始肝脏重量相等体积（ml/g）的匀浆缓冲液中。
17. 10 ml 30% 的 Accudenz 溶液至一只 40 ml 的超速离心管中（polycarbonate，直径 = 2 cm，Beckman 340382)， 然后轻轻地将2 ml 重悬的 L 组分铺在 Accudenz 溶液上，盖上管子，以 45000 g（在 Beckman Ti 50.2 转头中为 25000 r/min）离心 15 分钟。
18. 吸出界面物质，接着吸出上清。将沉淀重悬于相当于 1/4 肝脏重量的 Accudenz 介质中（或者悬于匀浆缓冲液中）。这就是最终的过氧化物酶体制备物。
来源：丁香实验
