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过氧化物酶体的分离和分析实验

实验分类:

细胞实验

最新修订时间:

简介

本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。

来源:丁香实验

操作方法

从大鼠肝脏中分离过氧化物酶体

1. 用乙醚或其他麻醉剂使麻醉,采用断头法处死。 2. 迅速取出肝脏,称重,置于冰上的重铝箔上使之迅速冰冷。 3. 用剪刀将肝脏组织剪成碎片并转移到一只冰冷的 Potter-EIvjhem 匀浆器管中加入三倍体积(ml/g 组织)的冷的匀浆缓冲液。 匀浆缓冲液(含有 0.1% 乙醇的蔗糖(0.25 mol/L),10 mmol/L TES,pH 7.5,1 mmoI/L Na4EDTA,PM

从豚鼠小肠黏膜中分离微过氧化物酶体

1. 处死麻醉后的豚鼠,取出全部的小肠(从胃到盲肠),用一只大的(50 ml)皮下注射器灌注冷的匀浆缓冲液来清洗其中的内容物。 2. 将小肠切成大约 10 cm 长的片段。将它们放在碎冰块上的冷的玻璃培养皿中。 3. 用一只玻璃片的边缘或一只小木棒轻轻地挤压并除去残余的食物颗粒及黏液。 4. 从每一块小肠片段上用稍大些的压力刮下并收集黏膜细胞。 5. 将黏膜细胞悬于 50 ml 的

蛋白质及标志酶的分析

1. 准备分析试剂: 缓冲液:可以采用 Tris-HCl(0.3 moI/L,pH7.5)或 MES(0.3 mol/L,pH 5.7)。 0.1 mol/L NaF 0.1 mol/L MgCl2 脂肪酸含量低的 BSA ( ICN) -20 mg/ml H2O 2. 向一只 16 mm x 125 mm 的螺口管中按顺序加入下列试剂: 缓冲液 0.15 ml BSA 0.05

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