材料与仪器
NaF MgCl2 BSA 棕榈酰辅酶A 氯仿-甲醇 液闪试剂
离心机
离心机
步骤
1. 准备分析试剂：
缓冲液：可以采用 Tris-HCl（0.3 moI/L，pH7.5）或 MES（0.3 mol/L，pH 5.7）。
0.1 mol/L NaF
0.1 mol/L MgCl2
脂肪酸含量低的 BSA ( ICN) -20 mg/ml H2O
2. 向一只 16 mm x 125 mm 的螺口管中按顺序加入下列试剂：
缓冲液 0.15 ml
BSA 0.05 ml
棕榈酰辅酶A 0.05 ml
NaF 0.05 ml
MgCl2 0.05 ml
DHA12P 0.05 ml
用于分析的收集物（0~0.1 mg 蛋白质）
加 H2O 至 0.6 ml 的体积
3. 将反应在 37℃ 保温 15 分钟。
4. 加入 2.25 ml 氯仿-甲醇（1:2）并混合均匀使反应终止。
5. 加入 0.75 ml 的氯仿和 0.75 ml 的 KCl-H3PO4（2~0.2 mol/L），振荡，在桌面离心机上离心 5 分钟（500~1000 g）。
6. 吸出上层并加入 2.5 ml 的 CH3Cl-甲醇-H2O (1:12:12) 及 0.1 ml ( 2 滴）的 6 mol/L H3PO4 洗涤下层两次，振荡并离心使之分层。
7. 将等份的洗涤后的下层液（一般为 1 ml，即总体积的 2/3）转至计数瓶中，在通风橱中加热并吹入空气使瓶内的溶剂蒸发。
8. 向干燥的残余物中加入液闪试剂，混合后使之溶解，在液闪计数器上确定放射性。
缓冲液：可以采用 Tris-HCl（0.3 moI/L，pH7.5）或 MES（0.3 mol/L，pH 5.7）。
0.1 mol/L NaF
0.1 mol/L MgCl2
脂肪酸含量低的 BSA ( ICN) -20 mg/ml H2O
2. 向一只 16 mm x 125 mm 的螺口管中按顺序加入下列试剂：
缓冲液 0.15 ml
BSA 0.05 ml
棕榈酰辅酶A 0.05 ml
NaF 0.05 ml
MgCl2 0.05 ml
DHA12P 0.05 ml
用于分析的收集物（0~0.1 mg 蛋白质）
加 H2O 至 0.6 ml 的体积
3. 将反应在 37℃ 保温 15 分钟。
4. 加入 2.25 ml 氯仿-甲醇（1:2）并混合均匀使反应终止。
5. 加入 0.75 ml 的氯仿和 0.75 ml 的 KCl-H3PO4（2~0.2 mol/L），振荡，在桌面离心机上离心 5 分钟（500~1000 g）。
6. 吸出上层并加入 2.5 ml 的 CH3Cl-甲醇-H2O (1:12:12) 及 0.1 ml ( 2 滴）的 6 mol/L H3PO4 洗涤下层两次，振荡并离心使之分层。
7. 将等份的洗涤后的下层液（一般为 1 ml，即总体积的 2/3）转至计数瓶中，在通风橱中加热并吹入空气使瓶内的溶剂蒸发。
8. 向干燥的残余物中加入液闪试剂，混合后使之溶解，在液闪计数器上确定放射性。
来源：丁香实验
