多核糖体的纯化

真细菌多核糖体 植物多核糖体
多核糖体蔗糖梯度缓冲液 蔗糖梯度缓冲液

一、真细菌多核糖体

1. 含有多核糖体（每管 0.6 ml ) 的上清铺到 15%~30% 蔗糖梯度的上面，在该蔗糖梯度的下面为 0.5 ml 的 60% 蔗糖铺垫液，内含如下缓冲液：

多核糖体蔗糖梯度缓冲液：

20 mmol/L Tris-HCl，pH 7.6

5 mmol/L MgCl₂

150 mmol/L NH₄CI

2. 用 Berkman SW 50.1 转头，以 245000 g 离心 130 分钟来沉淀多核糖体。

3. 倒掉上清并用 5 ml 冷的蔗糖梯度缓冲液漂洗以除去残余的蔗糖，将多核糖体重悬于 400 μl 相同的缓冲液中。将多核糖体贮存于 -80℃。

二、植物多核糖体

1. 将重悬的多核糖体铺在 15%~30% 的蔗糖梯度之上，梯度的底层为 0.5 ml 60% 的蔗糖铺垫液。用如下的缓冲液制备蔗糖梯度：

蔗糖梯度缓冲液：

20 mmol/L Tris-HCl，pH 7.5

5 mmol/L MgCl₂

0.2 mol/L KCl

2. 用 Beckman SW 50.1 转头，以 150000 g 离心 2 小时将多核糖体沉降下来。

3. 倒掉上清并用 5 ml 冷的蔗糖梯度缓冲液漂洗以除去残余的蔗糖，并将多核糖体重悬于相同的缓冲液中。将多核糖体贮存于 -80℃。