非固定细胞的无洗染色

细胞
蛋白酶 NST-DAPI 缓冲液 MFM 柠檬酸缓冲液 DNA 染色 裂解溶液
尼龙筛

一、组织培养细胞的染色

1. 通过对悬浮培养中的细胞倾析或对单层培养的细胞蛋白酶消化来收获细胞。计数细胞，800 g 慢速离心 3 分钟沉淀细胞。

2. 细胞染色。

3. 在 NST-DAPI 缓冲液中于冰上孵育细胞 15 分钟。

4. 用 35 μm 孔径的尼龙筛目过滤细胞。

5. 用流式细胞计量术分析染色细胞。

二、固体组织的染色

1. 如冷冻，将组织片放入装有补充 5% 小牛血清和 10% DMSO 的 MFM 的冷冻管中，置冰上，-70℃ 冷冻。制备时，在 37℃ 水浴中快速融解。不用的组织可以重新冷冻。

2. 组织染色。

(1) PI 染色

① 取约 2~3 mm³ 的组织片放入 60 mm 的培养皿中，加 0.5~1.0 ml 柠檬酸缓冲液，将培养皿置冰上或冷藏盒中。

② 用 2 枚解剖刀片将样品交叉切碎，剪切切碎的样品，首先几次通过 Rainin P1000 加样器尖，然后几次上下通过结核菌素注射针。不要企图将明显过大的片段通过注射针。

③ 将样品转移到一 5 ml 的一次性培养管中，取 200 μl 样品放入一支新管，加入 800 μl DNA 染色/裂解溶液，20 μl 煮沸过的 RNA 酶 A 进行步骤 3。

(2) DAPI 染色

① 取约 2~3 mm³ 的组织片放入 60 mm 的培养皿中，加 0.5~1.0 ml NST-DAPI 缓冲液，将培养皿置冰上或冷藏盒中。

② 用 2 枚解剖刀片将样品交叉切碎，剪切切碎的样品，首先几次上下通过结核菌素注射针。不要企图将明显过大的片段通过注射针。

③ 将样品转移到一 5 ml 的一次性培养管中。

3. 在冰上孵育培养管 15 分钟。

4. 用 35 μm 孔径的尼龙筛过滤样品。

5. 用流式细胞计量术分析。样品可加入 10% DMSO 冷冻于 -70℃，用于以后重新分析或分类。