固定细胞的PI单染色法
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方法一
1.收集细胞(1~5)×106个,500~1000r/min离心5min,弃去培养液。
2.3ml PBS洗一次。
3.离心去PBS,加入冰预冷的70%的乙醇固定,4℃,1h。
4.离心弃去固定液,3ml PBS重悬5min。
5.400目的筛网过滤1次,500~1000r/min离心5min,弃去PBS。
6.用1ml PI染液,4℃避光30min。
7.流式细胞仪检测:PI用氩离子激发荧光,激发光波波长为488nm,发射光波波长大于630nm,产生红色荧光,可分析前散射光对侧散射光的散点图及PI荧光的直方图。
方法二
1.收集细胞(1×106个),500~1000r/min离心5min,弃去培养液。
2.1ml PBS/FCS洗一次。
3.500~1000r/min离心5min去PBS/FCS,加入500μl PBS/FCS和500μl的多聚甲醛固定液,轻轻混匀,在4℃下固定4min。
4.500~1000r/min离心5min弃去固定液,室温加入含0.2% Tween的PBS 1ml,37℃孵育15min。
5.1ml PBS/FCS洗3次,每次5min。
6.400目的筛网过滤1次。
7.500~1000r/min离心5min去PBS/FCS,用1.0ml PI染液,4℃避光至少30min。染色在24h之内皆可行,流式细胞仪分析。