原理
培养物用甲醇固定，直接用未稀释的 Giemsa 液进行染色，然后1：10 稀释染液，清洗培养物，在潮湿状态下观察。
材料与仪器
D-PBSA D-PBSA:甲醇（1:1)
未稀释的Giemsa染液 甲醇 去离子水
未稀释的Giemsa染液 甲醇 去离子水
步骤
本程序假设用单层细胞进行染色，而固定的悬浮细胞也可以使用，但从第6 步开始。
1. 移除培养基。
2. 用 D-PBSA 冲洗单层细胞，去掉冲洗液。
3. 加 D-PBSA / 甲醇液 5 ml/25 cm2，静置 2 min，然后去掉 D-PBSA / 甲醇。
4. 加新甲醇 5 ml，静置 10 min。
5. 弃掉甲醇液，用无水甲醇，冲洗单层细胞，去掉甲醇。
6. 此时，培养瓶经干燥可贮存，也可直接进行染色。用新无水甲醇冲洗后直接染色是非常重要的，即使是干的培养瓶。如果甲醇倒出，培养瓶静置了一段时间后，残留的甲醇会吸收水分，从而妨碍下一步的染色，即使是干燥的单层细胞也可从空气中吸收水分。
7. 加入纯的 Giemsa 染液，2 ml/ 25 cm2，确保保持覆盖整层细胞。
8. 2 min 后，用 8 ml 水稀释染液，并轻轻晃动 2 min 。
9. 用水置换染液，使形成的浮渣流走，而不会留下来覆盖在细胞上，用自来水冲洗细胞，直到去除片状粉色本底（沉积），但不能漂掉细胞的染色（通常 10~20s）。
10. 将水倒出，用去离子水冲洗，在单层细胞仍处于湿润状态时，用显微镜观察细胞，干燥保存细胞，再观察时重新湿润。
1. 移除培养基。
2. 用 D-PBSA 冲洗单层细胞，去掉冲洗液。
3. 加 D-PBSA / 甲醇液 5 ml/25 cm2，静置 2 min，然后去掉 D-PBSA / 甲醇。
4. 加新甲醇 5 ml，静置 10 min。
5. 弃掉甲醇液，用无水甲醇，冲洗单层细胞，去掉甲醇。
6. 此时，培养瓶经干燥可贮存，也可直接进行染色。用新无水甲醇冲洗后直接染色是非常重要的，即使是干的培养瓶。如果甲醇倒出，培养瓶静置了一段时间后，残留的甲醇会吸收水分，从而妨碍下一步的染色，即使是干燥的单层细胞也可从空气中吸收水分。
7. 加入纯的 Giemsa 染液，2 ml/ 25 cm2，确保保持覆盖整层细胞。
8. 2 min 后，用 8 ml 水稀释染液，并轻轻晃动 2 min 。
9. 用水置换染液，使形成的浮渣流走，而不会留下来覆盖在细胞上，用自来水冲洗细胞，直到去除片状粉色本底（沉积），但不能漂掉细胞的染色（通常 10~20s）。
10. 将水倒出，用去离子水冲洗，在单层细胞仍处于湿润状态时，用显微镜观察细胞，干燥保存细胞，再观察时重新湿润。
注意事项
Giemsa 染色步骤简单，可提供对比强烈的多色性的染色，但沉淀出的染料，使细胞看起来呈斑点状。由于氧化原因，在染液表面形成沉淀， 当加入水时，在整个溶液中，特别是在载玻片的表面上形成浮渣，冲洗染液时通过向上提升液面，而不是倒出液体或取出栽载玻片，在最后步骤，为防止细胞和浮渣接触，彻底冲洗以便去掉留在制备物中的浮渣。
来源：丁香实验
