方案11.8 用10× 浓缩液配制培养基（用于密封的培养瓶）

配制全成分培养基时，准备好几个盛有无菌去离子蒸馏水的容器，一个容器的容量至少要够用1~3 周。加浓缩培养基和其他成分，调整pH , 直接使用或放回冰箱。

用于密封的培养瓶，含空气、低浓度 HCO₃^— 、大气 CO₂ 浓度和低缓冲力。

UPW 培养基10×浓缩液 谷氨酰胺 牛血清 抗生素 青霉素 链霉素 HEPES
NaOH

1. 将血清和谷氨酰胺解冻，置于超净工作台内。

2. 所有曾放入水浴锅的瓶子都要擦干净后再放入超净台。

3. 加人上述“无菌溶液”所列成分，加 HEPES 可能会增加缓冲能力，对于某些细胞系，在高细胞密度情况下如果产生很多酸性物质，培养瓶可使其排出。

4. 加人 1 mol/L NaOH ，使 pH 达到 7.2 （20°C ) , 孵育之后培养基的 pH 将上升至 7.4 (37°C )，但如果是第 1 次使用的配方，这个数值可能还需要通过滴定试验来检验。

如果需要加人其他成分，而这些成分是用水配制的，，则加入前应先从已准备好的水中取出相同体积的水；如果这些成分溶解在等渗盐溶液中，则只要加入至终体积。因为血清是等渗的，所以血清也是加人至终体积，尽管这样做会稀释培养基的营养成分。

在37°C 时要不断地平衡和检测pH , 随着温度的升高，CO₂ 的溶解度会降低，HEPES 的 pKa 也会发生变化。