原理
配制全成分培养基时，准备好几个盛有无菌去离子蒸馏水的容器，一个容器的容量至少要够用1~3 周。加浓缩培养基和其他成分，调整pH , 直接使用或放回冰箱。
用于开式容器于 CO2 温箱中培养，或在密闭的瓶中充了 CO2 气体，CO2 浓度为 5 % ，高 HCO3- 浓度。
用于开式容器于 CO2 温箱中培养，或在密闭的瓶中充了 CO2 气体，CO2 浓度为 5 % ，高 HCO3- 浓度。
材料与仪器
UPW 培养基10×浓缩液 谷氨酰胺 牛血清 抗生素 青霉素 链霉素
NaOH
吸液管
NaOH
吸液管
步骤
1. 将血清和谷氨酰胺解冻，置于超净工作台内。
2. 所有曾放入水浴锅的瓶子都要擦干净后再放人超净台。
3. 加入上述“无菌溶液”所列成分。
4 . 加人 1 mol/L NaOH ，使 pH 达到 7.2 (20°C ) , 孵育之后培养基的 pH 将上升至 7.4 (37°C ) 但如果是第 1 次使用的配方，这个数值可能还需要通过滴定试验来检验。
(a) 在 5 个培养皿中分别加入 5 ml 培养基。
(b) 每个培养皿中分别加人 5~50 μl 不同量的 1 mol/L NaOH 。
(c) 置于 5% CO2 温箱中孵育至少 2 h ，最好过夜。
2. 所有曾放入水浴锅的瓶子都要擦干净后再放人超净台。
3. 加入上述“无菌溶液”所列成分。
4 . 加人 1 mol/L NaOH ，使 pH 达到 7.2 (20°C ) , 孵育之后培养基的 pH 将上升至 7.4 (37°C ) 但如果是第 1 次使用的配方，这个数值可能还需要通过滴定试验来检验。
(a) 在 5 个培养皿中分别加入 5 ml 培养基。
(b) 每个培养皿中分别加人 5~50 μl 不同量的 1 mol/L NaOH 。
(c) 置于 5% CO2 温箱中孵育至少 2 h ，最好过夜。
注意事项
如果需要加人其他成分，而这些成分是用水配制的，，则加入前应先从已准备好的水中取出相同体积的水；如果这些成分溶解在等渗盐溶液中，则只要加入至终体积。因为血清是等渗的，所以血清也是加人至终体积，尽管这样做会稀释培养基的营养成分。
在37°C 时要不断地平衡和检测pH , 随着温度的升高，CO2 的溶解度会降低，HEPES 的 pKa 也会发生变化。
在37°C 时要不断地平衡和检测pH , 随着温度的升高，CO2 的溶解度会降低，HEPES 的 pKa 也会发生变化。
来源：丁香实验
