原理
多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，在有氧的条件下，能使一元酚和二元酚氧化产生醌。用分光光度法在525nm波长下测其吸光度，即可计算出多酚氧化酶的活力和比活性。反应式如下：.
材料与仪器
马铃薯块茎
聚乙烯吡咯烷酮 磷酸缓冲液 磷酸缓冲液 和度硫酸铵 儿茶酚 三氯乙酸
UV－1206 UV－1240分光光度计 离心机 恒温水浴 研钵或匀浆机 试管 移液管 纱布袋
聚乙烯吡咯烷酮 磷酸缓冲液 磷酸缓冲液 和度硫酸铵 儿茶酚 三氯乙酸
UV－1206 UV－1240分光光度计 离心机 恒温水浴 研钵或匀浆机 试管 移液管 纱布袋
步骤
1. 粗酶液的制备
称取马铃薯块茎5g于研钵中，加入0.5g 不溶性聚乙烯吡咯烷酮（事先用蒸馏水浸洗，然后过滤以除去杂质）和100 ml 0.1mol·L－1pH6.5磷酸缓冲液,磨成匀浆，用几层纱布袋过滤，滤液加入30%饱和度硫酸铵，离心除沉淀，上清液再加硫酸铵使达60％饱和度，离心收集沉淀。将所得沉淀溶于2～3 ml 0.01mol·L－1 pH6.5磷酸缓冲液中，即为粗制酶液。
2. 活性酶的测定
在试管中加入3.9 ml 0.05 mol·L－1 pH5.5磷酸缓冲液，1.0 ml 0.1 mol·L－1儿茶酚在37℃恒温水浴中保温10min ，然后加入0.5 ml酶液（可视酶活性增减用量），迅速摇匀，倒入比色杯内，于525nm波长处以时间扫描方式，在1～2min内测定吸光度变化（A）值。
称取马铃薯块茎5g于研钵中，加入0.5g 不溶性聚乙烯吡咯烷酮（事先用蒸馏水浸洗，然后过滤以除去杂质）和100 ml 0.1mol·L－1pH6.5磷酸缓冲液,磨成匀浆，用几层纱布袋过滤，滤液加入30%饱和度硫酸铵，离心除沉淀，上清液再加硫酸铵使达60％饱和度，离心收集沉淀。将所得沉淀溶于2～3 ml 0.01mol·L－1 pH6.5磷酸缓冲液中，即为粗制酶液。
2. 活性酶的测定
在试管中加入3.9 ml 0.05 mol·L－1 pH5.5磷酸缓冲液，1.0 ml 0.1 mol·L－1儿茶酚在37℃恒温水浴中保温10min ，然后加入0.5 ml酶液（可视酶活性增减用量），迅速摇匀，倒入比色杯内，于525nm波长处以时间扫描方式，在1～2min内测定吸光度变化（A）值。
常见问题
酶活性的计算：
来源：丁香实验
