材料与仪器
组织
Hanks 培养液 胰蛋白酶 NaHCO3
吸管 培养瓶 烧杯 眼科剪 眼科镊
Hanks 培养液 胰蛋白酶 NaHCO3
吸管 培养瓶 烧杯 眼科剪 眼科镊
步骤
1. 剪切
把组织小块（1cm3）置入小烧杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂液二三次以去掉表面血污，吸净Hanks液，用眼科剪反复剪切成1mm3块为止；
3. 轻轻翻转培养瓶，令瓶底向上；注意翻瓶时勿令组织小块流动，塞好瓶塞，置36.5 ℃温箱2 小时左右（勿超过4 小时），使小块微干涸；
4. 培养
从温臬中取出培养瓶，开塞，46 度斜持培养瓶（瓶底仍向上），向瓶底角部轻轻注入培养液小许，然后缓缓再把培养瓶翻转过来，让培养液慢慢覆盖附于瓶底上的组织小块（组织小块附着尚不牢，注意不要把组织块冲走）；置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后，再补加培养液。
把组织小块（1cm3）置入小烧杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂液二三次以去掉表面血污，吸净Hanks液，用眼科剪反复剪切成1mm3块为止；
2. 摆布
用弯头吸管吸取若干小块，置入培养瓶中；用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底上，小块相互距离以0.5 cm 为宜，每一25 ml培养瓶底可摆布20~30 块；
用弯头吸管吸取若干小块，置入培养瓶中；用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底上，小块相互距离以0.5 cm 为宜，每一25 ml培养瓶底可摆布20~30 块；
3. 轻轻翻转培养瓶，令瓶底向上；注意翻瓶时勿令组织小块流动，塞好瓶塞，置36.5 ℃温箱2 小时左右（勿超过4 小时），使小块微干涸；
4. 培养
从温臬中取出培养瓶，开塞，46 度斜持培养瓶（瓶底仍向上），向瓶底角部轻轻注入培养液小许，然后缓缓再把培养瓶翻转过来，让培养液慢慢覆盖附于瓶底上的组织小块（组织小块附着尚不牢，注意不要把组织块冲走）；置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后，再补加培养液。
常见问题
一、评价
翻转培养瓶的目的是为使组织块微干涸，以利附和免从瓶壁流失，但时间不宜过长，超过三四小时以上可能对组织有不利影响。
组织块培养法操作简便，顺利情况下，组织小块贴壁培养后24 小时，细胞即可从小块边缘向四周游出，通过生长增殖，最终亦可连接成片；原组织小块可完全散成细胞而消失。如组织块过大，残留小块换液时弃掉或再置另瓶中继续培养。
组织块通过反复剪切可能受一定损伤，并非每块组织都有生长能力，但只要有一部分能生长往往即可形成单层。
翻转培养瓶的目的是为使组织块微干涸，以利附和免从瓶壁流失，但时间不宜过长，超过三四小时以上可能对组织有不利影响。
组织块培养法操作简便，顺利情况下，组织小块贴壁培养后24 小时，细胞即可从小块边缘向四周游出，通过生长增殖，最终亦可连接成片；原组织小块可完全散成细胞而消失。如组织块过大，残留小块换液时弃掉或再置另瓶中继续培养。
组织块通过反复剪切可能受一定损伤，并非每块组织都有生长能力，但只要有一部分能生长往往即可形成单层。
来源：丁香实验
