原理
斐林试剂由甲、乙两种溶液组成。甲液含有硫酸铜和次甲基蓝；乙液含有氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。混合时，硫酸铜与氢氧化钠起作用生成蓝色氢氧化铜沉淀，而酒石酸钾钠在碱性溶液中使沉淀的氢氧化铜溶解而成络合物。络合物与还原糖共热时，两价铜被还原为一价氧化亚铜(红色沉淀)，再与试剂中亚铁氰化钾反应生成可溶性化合物而不复析出。斐林试剂中两价铜被还原完毕后才能使次甲基蓝还原为无色，故次甲基蓝在此作为指示剂。
材料与仪器
葡萄糖
硫酸铜 次甲基蓝 酒石酸钾钠 氢氧化钠 亚铁氰化钾 盐酸 氢氧化钠
滴定管 三角瓶 电子天平 电炉
硫酸铜 次甲基蓝 酒石酸钾钠 氢氧化钠 亚铁氰化钾 盐酸 氢氧化钠
滴定管 三角瓶 电子天平 电炉
步骤
溶液配制：
1. 斐林试剂甲液：称取15 g硫酸铜，0.05 g次甲基蓝溶于蒸馏水中并定容至1 L。
2. 斐林试剂乙液：50 g酒石酸钾钠，54 g氢氧化钠，4 g亚铁氰化钾溶于蒸馏水中并定容至1L。
3. 6 mol/L盐酸：量取浓盐酸500 ml加蒸馏水至1 L。
4. 6 mol/L氢氧化钠：称取氢氧化钠240 g溶于蒸馏水至1 L。
5. 标准葡萄糖溶液(0.1%)：精确称取葡萄糖（在105 ℃干燥至恒重）1 g溶于蒸馏水中并定容至1 L。
操作步骤：
1.空白管测定:取斐林试剂甲、乙液各5 ml，置250 ml三角瓶中，由滴定管加适量0.1%标准葡萄糖溶液，在电炉上加热至沸，然后以4～5 s一滴的速度继续自滴定管中加入标准葡萄糖溶液，滴定至蓝色消失，记下总共所消耗的葡萄糖体积(A)。
2.样品测定:6～7 ml待测样品溶液（含糖量在3～4 mg/6～7 ml），加斐林试剂甲、乙液各5 ml，置250 ml三角烧瓶中，同空白测定一样操作，记下所耗标准葡萄糖体积(B)。
3.计算:
1. 斐林试剂甲液：称取15 g硫酸铜，0.05 g次甲基蓝溶于蒸馏水中并定容至1 L。
2. 斐林试剂乙液：50 g酒石酸钾钠，54 g氢氧化钠，4 g亚铁氰化钾溶于蒸馏水中并定容至1L。
3. 6 mol/L盐酸：量取浓盐酸500 ml加蒸馏水至1 L。
4. 6 mol/L氢氧化钠：称取氢氧化钠240 g溶于蒸馏水至1 L。
5. 标准葡萄糖溶液(0.1%)：精确称取葡萄糖（在105 ℃干燥至恒重）1 g溶于蒸馏水中并定容至1 L。
操作步骤：
1.空白管测定:取斐林试剂甲、乙液各5 ml，置250 ml三角瓶中，由滴定管加适量0.1%标准葡萄糖溶液，在电炉上加热至沸，然后以4～5 s一滴的速度继续自滴定管中加入标准葡萄糖溶液，滴定至蓝色消失，记下总共所消耗的葡萄糖体积(A)。
2.样品测定:6～7 ml待测样品溶液（含糖量在3～4 mg/6～7 ml），加斐林试剂甲、乙液各5 ml，置250 ml三角烧瓶中，同空白测定一样操作，记下所耗标准葡萄糖体积(B)。
3.计算:
来源：丁香实验
