原理
胶原酶是一种由细菌中提取出的酶，对胶原有很强的消化作用，适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织等。
上皮细胞本身对胶原酶有一定耐性，但胶原酶对细胞间质有好的消化作用，可使上皮细胞与胶原成分脱离而不受伤害，效果甚好。
此酶在钙和镁离子存在情况下仍有活性，故可用BSS和含有血清的培养液配制。
上皮细胞本身对胶原酶有一定耐性，但胶原酶对细胞间质有好的消化作用，可使上皮细胞与胶原成分脱离而不受伤害，效果甚好。
此酶在钙和镁离子存在情况下仍有活性，故可用BSS和含有血清的培养液配制。
材料与仪器
胶原酶
培养瓶 离心管
培养瓶 离心管
步骤
1. 把漂洗干净的组织剪切成1—5 mm3 块，向每一培养瓶中置入若干块；
2. 向每瓶中加入4.5 ml培养液，再注入5 ml粗胶原酶，使最终浓度为200 U/ml，pH6.5；
3. 置36.5 ℃中4~48 小时；如消化缓慢可延长到3~5 天，期间无需摇动；可换液1 次（仍含有胶原酶）；
4. 检查消化效应可用轻轻摇动培养瓶的方法
如见组织块已变软，散于瓶底，振荡后即散成细胞团和单个细胞，此时可轻轻倒出培养液，瓶内可能有很多巨噬细胞已附于瓶底，借此能把巨噬细胞从其它细胞中分开，可用于单独培养或不用弃之；
5. 低速离心培养液5 分钟后，去上清，重悬于BSS中，再低速离心5 分钟，去上清；
6. 加入新培养液制备成细胞悬液，可接种进行培养；胰蛋白酶和胶原酶消化时间与浓度上的差异，依消化温度而异，另外两种酶也可协同应用，浓度为：胰蛋白酶0.1 mg+胶原酶0.25 mg/ml。
2. 向每瓶中加入4.5 ml培养液，再注入5 ml粗胶原酶，使最终浓度为200 U/ml，pH6.5；
3. 置36.5 ℃中4~48 小时；如消化缓慢可延长到3~5 天，期间无需摇动；可换液1 次（仍含有胶原酶）；
4. 检查消化效应可用轻轻摇动培养瓶的方法
如见组织块已变软，散于瓶底，振荡后即散成细胞团和单个细胞，此时可轻轻倒出培养液，瓶内可能有很多巨噬细胞已附于瓶底，借此能把巨噬细胞从其它细胞中分开，可用于单独培养或不用弃之；
5. 低速离心培养液5 分钟后，去上清，重悬于BSS中，再低速离心5 分钟，去上清；
6. 加入新培养液制备成细胞悬液，可接种进行培养；胰蛋白酶和胶原酶消化时间与浓度上的差异，依消化温度而异，另外两种酶也可协同应用，浓度为：胰蛋白酶0.1 mg+胶原酶0.25 mg/ml。
经过胶原酶消化后的上皮组织，由于上皮细胞对酶有耐受性，可能有一些上皮细胞团尚未被完全消化开。成小团的上皮细胞比分散的单个上皮细胞更易生长，因此不必要再做进一步消化处理。胶原酶与胰蛋白酶并用时，尚可外加透明质酸酶。透明质酸酶对细胞表面糖基有作用。胶原酶与胰蛋白酶两者结合使用，对分散大鼠和兔肝等组织非常有效。
来源：丁香实验
