组织的分离实验

一、切割分离法 在进行组织块培养时，可采用剪切法，一般多剪切成1 mm3大小的块。 具体操作如下： 1. 无菌切取1 cm3组织一块，置入青霉素瓶或小烧杯中，左手斜持容器，右手持眼科尖剪或弯剪（剪柄较长为好）伸入容器中，反复剪切组织至1 mm3大小为止（成糊状）。 2. 用吸管吸取Hanks液把附着在剪刀上的组织小块冲下，并再补加3~5 毫升Hanks液后，用吸管反复轻轻吸吹冲打片刻，低速

使用胰蛋白酶消化细胞法如下： 1. 剪切 把组织剪切成3~5 立方毫米的小块； 2. 加液 把组织置入三角烧瓶中（瓶内有铁蕊的搅棒或玻璃小球），注入比组织量多30~50 倍的0.25%的胰蛋白酶（预加温至37 ℃）； 3. 消化 置电磁搅拌器台上，消化30~60 分钟，或置于37 ℃水浴中，或放于37 ℃温箱中；在两种情况下

1. 把漂洗干净的组织剪切成1—5 mm3 块，向每一培养瓶中置入若干块； 2. 向每瓶中加入4.5 ml培养液，再注入5 ml粗胶原酶，使最终浓度为200 U/ml，pH6.5； 3. 置36.5 ℃中4~48 小时；如消化缓慢可延长到3~5 天，期间无需摇动；可换液1 次（仍含有胶原酶）； 4. 检查消化效应可用轻轻摇动培养瓶的方法 如见组织块已变软，散于瓶底，振

国产淋巴细胞分层液（Lyphocyte Separation Medium）效果很好。分层液是根据细胞比重不同，使各类细胞相互分开的。红细胞比重1.092，淋巴细胞和大单核等白细胞比重为1.070；分层液适用于分离血中淋巴细胞。 1. 取抗凝血若干毫升； 2. 按1：1 加入无菌分层液（滤过除菌）后，800—1000 转离心； 3. 无菌分离出白细胞（白细胞位于红细胞上层，

用ETDA 和胰蛋白酶混合消化法传代的过程如下 1. 吸出培养瓶内营养液，注入EDTA（0.02%）和胰蛋白酶（0.25%）混合液（1：1），注入量以能覆盖细胞为度，置37 ℃温箱或室温中作用3 分~5 分钟。 在消化过程中，要在镜下随时监视细胞状态，当见到细胞胞质回缩，胞体趋于变圆，细胞相互间缝隙变大时，便立即终止消化。 细胞上述变化在已连接成片的细胞最为明显；可见细胞由于胞质