原理
大肠杆菌的许多菌株在穿刺瓶中可以保存数年，在-70 °C则可以无限期保存。
材料与仪器
琼脂 DMSO
试管 平板
试管 平板
步骤
一、穿刺保存
1. 在一个耐高压的带有橡皮塞或Teflon盖的气密性小瓶中加人2/3体积穿刺培养基。
2. 挑取一个单菌落，反复将接种环深刺人琼脂中。
3. 拧松盖子，于37 °C培养（8~12 h ）直到在穿刺孔迹中的细菌生长至可见的雾状。
4. 拧紧盖子于15~22 °C存放于暗处。
5. 按以下方法复苏菌株
用一支无菌接种环挑取一些带有细菌的琼脂，然后涂布于LB平板上并划线以得到单菌落。
二、冷冻保存
1. 将2 ml对数生长中期培养液或1 ml新鲜饱和的培养液加人到一穿刺小瓶或Nunc小瓶中，这些小瓶中已装有1 ml甘油溶液或含7%二甲基亚砜（DMSO）。
最好使用反应级别或分光光度学级别的DMSO作为冻存液，因为这样的试剂在存储时通常盖得很严实。
2. 保存于 -20°C或 -70°C。
3. 复苏时，用一无菌牙签或吸管刮取固体冰碴片，然后在LB平板上划线。仔细操作不要让其融化。
1. 在一个耐高压的带有橡皮塞或Teflon盖的气密性小瓶中加人2/3体积穿刺培养基。
2. 挑取一个单菌落，反复将接种环深刺人琼脂中。
3. 拧松盖子，于37 °C培养（8~12 h ）直到在穿刺孔迹中的细菌生长至可见的雾状。
4. 拧紧盖子于15~22 °C存放于暗处。
5. 按以下方法复苏菌株
用一支无菌接种环挑取一些带有细菌的琼脂，然后涂布于LB平板上并划线以得到单菌落。
二、冷冻保存
1. 将2 ml对数生长中期培养液或1 ml新鲜饱和的培养液加人到一穿刺小瓶或Nunc小瓶中，这些小瓶中已装有1 ml甘油溶液或含7%二甲基亚砜（DMSO）。
最好使用反应级别或分光光度学级别的DMSO作为冻存液，因为这样的试剂在存储时通常盖得很严实。
2. 保存于 -20°C或 -70°C。
于-70°C保存时，大多数菌株可保持更长的存活时间。
3. 复苏时，用一无菌牙签或吸管刮取固体冰碴片，然后在LB平板上划线。仔细操作不要让其融化。
来源：丁香实验
