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过碘酸雪夫反应(PAS)

相关实验:细胞组分的化学反应实验

最新修订时间:

原理

组织、细胞的多糖、粘多糖及粘蛋白等都可用PAS法来显示,其化学基础是利用过碘酸的氧化作用,打开碳链形成醛,生成的醛基与Schiff试剂中的无色品红反应形成紫红色化合物。

材料与仪器

小白鼠
PBS缓冲液 丙酮 二甲苯 乙醇 三氯醋酸 固绿 硫酸铜 联苯胺混合液 番红 过碘酸酒精液 Schiff氏酒精液 亚硫酸水 苏木精 Carnoy固定液
光学显微镜 解剖器材 蜡盘 载玻片 吸水纸 染色缸 盖玻片 水浴箱

步骤

一、方法

1.  取1~2 mm 厚的肝组织块,用Carnoy氏液4℃固定4~6小时。

2.  乙醇脱水、二甲苯透明。石蜡包埋,切片。

3.  用70%乙醇展片。

4.  脱蜡:二甲苯(1)5分钟→二甲苯(2)5分钟→100%乙醇5分钟→含1%火棉胶的乙醇液1分钟→70%乙醇1分钟。

5.  直接浸入过碘酸酒精液反应5~15分钟,经70%乙醇洗片刻。

6.  浸入Schiff氏酒精液反应15分钟。

7.  亚硫酸水洗三次,以洗去多余的非特异性结合的色素,以及扩散的染料。

8.  流水冲洗3~5分钟。

9.  蒸馏水洗。

10.  浸入Ehrlich苏木精复染20~30秒,使细胞核着色。

11.  脱水:95%乙醇3分钟二次→100%乙醇3分钟二次→二甲苯透明10分钟二次。

12.  加盖片镜检或树胶封固后镜检。

二、结果

细胞中呈紫红的颗粒即为糖原。

来源:丁香实验

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