原理
组织、细胞的多糖、粘多糖及粘蛋白等都可用PAS法来显示,其化学基础是利用过碘酸的氧化作用,打开碳链形成醛,生成的醛基与Schiff试剂中的无色品红反应形成紫红色化合物。
材料与仪器
小白鼠
PBS缓冲液 丙酮 二甲苯 乙醇 三氯醋酸 固绿 硫酸铜 联苯胺混合液 番红 过碘酸酒精液 Schiff氏酒精液 亚硫酸水 苏木精 Carnoy固定液
光学显微镜 解剖器材 蜡盘 载玻片 吸水纸 染色缸 盖玻片 水浴箱
PBS缓冲液 丙酮 二甲苯 乙醇 三氯醋酸 固绿 硫酸铜 联苯胺混合液 番红 过碘酸酒精液 Schiff氏酒精液 亚硫酸水 苏木精 Carnoy固定液
光学显微镜 解剖器材 蜡盘 载玻片 吸水纸 染色缸 盖玻片 水浴箱
步骤
一、方法
1. 取1~2 mm 厚的肝组织块,用Carnoy氏液4℃固定4~6小时。
2. 乙醇脱水、二甲苯透明。石蜡包埋,切片。
3. 用70%乙醇展片。
4. 脱蜡:二甲苯(1)5分钟→二甲苯(2)5分钟→100%乙醇5分钟→含1%火棉胶的乙醇液1分钟→70%乙醇1分钟。
5. 直接浸入过碘酸酒精液反应5~15分钟,经70%乙醇洗片刻。
6. 浸入Schiff氏酒精液反应15分钟。
7. 亚硫酸水洗三次,以洗去多余的非特异性结合的色素,以及扩散的染料。
8. 流水冲洗3~5分钟。
9. 蒸馏水洗。
10. 浸入Ehrlich苏木精复染20~30秒,使细胞核着色。
11. 脱水:95%乙醇3分钟二次→100%乙醇3分钟二次→二甲苯透明10分钟二次。
12. 加盖片镜检或树胶封固后镜检。
二、结果
细胞中呈紫红的颗粒即为糖原。
来源:丁香实验