原理
由于不同的蛋白质分子所带的碱性和酸性基团的数目不同，在pH值不同的溶液中，蛋白质分子所带的净电荷多少不同。如在生理条件下，整个蛋白质所带负电荷多，则为酸性蛋白质；带正电荷多，则为碱性蛋白质。据此，可将标本经三氯醋酸处理提出核酸后，用不同pH值的固绿染液分别染色，细胞内的酸性蛋白和碱性蛋白质显示出来。
材料与仪器
小白鼠
PBS缓冲液 丙酮 二甲苯 乙醇 三氯醋酸 固绿 硫酸铜 联苯胺混合液 番红 过碘酸酒精液 Schiff氏酒精液 亚硫酸水 苏木精 Carnoy固定液
光学显微镜 解剖器材 蜡盘 载玻片 吸水纸 染色缸 盖玻片 水浴箱
PBS缓冲液 丙酮 二甲苯 乙醇 三氯醋酸 固绿 硫酸铜 联苯胺混合液 番红 过碘酸酒精液 Schiff氏酒精液 亚硫酸水 苏木精 Carnoy固定液
光学显微镜 解剖器材 蜡盘 载玻片 吸水纸 染色缸 盖玻片 水浴箱
步骤
一、方法
1. 以破坏脊髓法处死蟾蜍，将其腹面向上放人蜡盘中，剪开胸腔，打开心包。小心将心脏剪一小口，取心脏血一滴滴在干净载玻片一端，推片，按此法制备二张血涂片，室温晾干。
2. 将涂片作好标记放在70%乙醇中固定5分钟，室温晾干。
3. 放入5%三氯醋酸中60℃30分钟，抽提出核酸。
4. 清水冲洗多次（3分钟以上），以冲去痕迹的三氯醋酸。
5. 滤纸吸干玻片上水分。
6. 一张片放入0.1%碱性固绿（pH8.0~8.5）中染色10~15分钟，另一张片放入0.1%酸性固绿（pH2.0~2.5）染色5~10分钟。
7. 清水冲洗，盖上盖片镜检。
二、结果
经碱性固绿染色片中，胞质、核仁不着色，细胞核大部分被染成绿色，是为碱性蛋白质存在处。经酸性固绿染色片中，因胞质和核仁中有酸性蛋白，被染成绿色。
来源：丁香实验
