甲硫氨酸短时间标记贴壁培养细胞

1.  在100 mm 直径的培养皿上培养贴壁细胞（0.5~2×10⁷）至70%~90%汇片，吸去培养液，用10 ml 于37℃短时间标记培养基轻轻搖晃冼两次细胞。

2.  加入5 ml 于37℃短时间标记培养基，在5%CO₂的加湿培养箱于37℃温育15 min，以耗尽细胞内的甲硫氨酸。

3.  制备［³⁵S］甲硫氨酸工作液。

4.  除去细胞上的培养液，加入2~4 ml ［³⁵S］甲硫氨酸工作液，在5%CO₂的加湿培养箱于37℃温育30 min~3 h。

5.  除去细胞上的培养液，用10 冰冷PBS缓冲液洗细胞1次后弃去，加入10 ml 冰冷PBS刮下培养皿上的细胞。

 

6.  将细胞悬液移至15 ml 圆锥试管，于4℃ 300 g 离心5 min，弃上清。

7.  处理和分析细胞。