材料与仪器
细胞
PBS 甲硫氨酸
培养箱 离心机
PBS 甲硫氨酸
培养箱 离心机
步骤
1. 在100 mm 直径的培养皿上培养贴壁细胞（0.5~2×107）至70%~90%汇片，吸去培养液，用10 ml 于37℃短时间标记培养基轻轻搖晃冼两次细胞。
2. 加入5 ml 于37℃短时间标记培养基，在5%CO2的加湿培养箱于37℃温育15 min，以耗尽细胞内的甲硫氨酸。
3. 制备［35S］甲硫氨酸工作液。
4. 除去细胞上的培养液，加入2~4 ml ［35S］甲硫氨酸工作液，在5%CO2的加湿培养箱于37℃温育30 min~3 h。
2. 加入5 ml 于37℃短时间标记培养基，在5%CO2的加湿培养箱于37℃温育15 min，以耗尽细胞内的甲硫氨酸。
3. 制备［35S］甲硫氨酸工作液。
4. 除去细胞上的培养液，加入2~4 ml ［35S］甲硫氨酸工作液，在5%CO2的加湿培养箱于37℃温育30 min~3 h。
5. 除去细胞上的培养液，用10 冰冷PBS缓冲液洗细胞1次后弃去，加入10 ml 冰冷PBS刮下培养皿上的细胞。
6. 将细胞悬液移至15 ml 圆锥试管，于4℃ 300 g 离心5 min，弃上清。
7. 处理和分析细胞。
7. 处理和分析细胞。
来源：丁香实验
