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简介
来源:丁香实验
操作方法
1. 培养悬浮细胞至对数增长期,室温300 g 离心5 min。回收107~108细胞。 2. 每2×107细胞用约10 ml 37℃的短时间标记培养基在圆锥型试管中洗涤,于室温300 g 离心5 min 回收细胞,小心重悬细胞并重复洗涤过程。 3. 以37℃的短时间标记培养基重悬至5×106细胞/ml,于37℃保温15 min 以耗尽细胞内的甲硫氮酸,间歇摇动。 4.
甲硫氨酸短时间标记贴壁培养细胞1. 在100 mm 直径的培养皿上培养贴壁细胞(0.5~2×107)至70%~90%汇片,吸去培养液,用10 ml 于37℃短时间标记培养基轻轻搖晃冼两次细胞。 2. 加入5 ml 于37℃短时间标记培养基,在5%CO2的加湿培养箱于37℃温育15 min,以耗尽细胞内的甲硫氨酸。 3. 制备[35S]甲硫氨酸工作液。 4. 除去细胞上的培养液,加入2~4 ml[35S]甲
甲硫氨酸对细胞进行脉冲追踪标记1. 准备和用[35S]甲硫氨酸标记细胞,用0.2~1 mCi/ml 的[35S]甲疏氨酸脉冲标记细胞5~30 min。 2. 脉冲标记后,除去[35S]甲硫氨酸培养基,用10 ml 于37℃追加培养基冼细胞1次,加入10 ml 追加培养基继续培养。 3. 在37℃温育至设定时间。悬浮培养细胞在盖紧盖子的试管中旋转温育,贴附培养细胞在37℃ 5%CO2的加湿培养箱中培养。
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