材料与仪器
DNA
NaOH EDTA 乙酸钠 乙醇
离心管 离心机 摇床
NaOH EDTA 乙酸钠 乙醇
离心管 离心机 摇床
步骤
1. 加入约0.5 pmol 重组质粒DNA于0.5 ml 微量离心管中，如果体积大于20 μl 应以乙醇沉淀，重溶于20 μl 水。
2. 如果体积小于20 μl，用水补足20 μl。
3. 加入2 μl 2 mol/l NaOH / 2 mmol/l EDTA，用微量移液器上下抽吸轻轻混匀，于25~37℃温育5 min 后，样品置于冰浴，加入水，用微量移液器彻底混匀。
4. 加入75 μl 3 mol/l pH6.0的乙酸钠缓冲液，以中和DNA溶液。
5. 用微量移液器上下抽吸溶液以彻底混匀，滴1 μl 于pH试纸测pH。
6. 然后每1 μl 地逐次加入3 mol/pH6.0缓冲液直至pH≤7.0。
7. 加入75 μl 95%乙醇，干冰放置10 min。
8. 于4 ℃微量离心10 min，小心移去并弃上清。
9. 加入400 μl 70%乙醇，于4℃微量离心10 min，然后小心弃去乙醇。
10. 在Speedvac真空旋转蒸发器中干燥10 min，贮存于20℃（可长达几周）直至作为模板用于双脱氧反应。
2. 如果体积小于20 μl，用水补足20 μl。
3. 加入2 μl 2 mol/l NaOH / 2 mmol/l EDTA，用微量移液器上下抽吸轻轻混匀，于25~37℃温育5 min 后，样品置于冰浴，加入水，用微量移液器彻底混匀。
4. 加入75 μl 3 mol/l pH6.0的乙酸钠缓冲液，以中和DNA溶液。
5. 用微量移液器上下抽吸溶液以彻底混匀，滴1 μl 于pH试纸测pH。
6. 然后每1 μl 地逐次加入3 mol/pH6.0缓冲液直至pH≤7.0。
7. 加入75 μl 95%乙醇，干冰放置10 min。
8. 于4 ℃微量离心10 min，小心移去并弃上清。
9. 加入400 μl 70%乙醇，于4℃微量离心10 min，然后小心弃去乙醇。
10. 在Speedvac真空旋转蒸发器中干燥10 min，贮存于20℃（可长达几周）直至作为模板用于双脱氧反应。
来源：丁香实验
