制备 DNA 测序模板实验

1. 如果起始用M13复制型DNA或M13单链DNA，以0.5 ng 重组M13mp复制型DNA或5~10 ng 单链DNA转化40 μl 感受态大肠杆菌DH5αF'株，按热休克方案进行转化。 2. 转化细胞加0.2 ml大肠杆菌DH5αF'过夜培养物后，混匀于3 ml H顶层琼脂，倾倒于37℃平板，倒扣后置于37℃过夜。 3. 大肠杆菌DH5αF'过夜培养物以2×TY培养液稀释

1. 在新鲜配制的λ顶层琼脂糖和λ琼脂糖平板上，通过在平板上裂解适于λ噬菌体生长的大肠杆菌菌株，制备重组λ噬菌体毒种原液。 2. 取700 μl 毒种液加入无菌的1.5 ml 微量离心管中，加入1 μl 1 mg/ml 的DNA酶Ⅰ及1 μl 1 mg/ml 热处理过的RNA酶A，于37℃温育30 min。 3. 加入700 μl λPEG溶液，冰浴放置1 h。 4. 4

1. 加入约0.5 pmol 重组质粒DNA于0.5 ml 微量离心管中，如果体积大于20 μl 应以乙醇沉淀，重溶于20 μl 水。 2. 如果体积小于20 μl，用水补足20 μl。 3. 加入2 μl 2 mol/l NaOH / 2 mmol/l EDTA，用微量移液器上下抽吸轻轻混匀，于25~37℃温育5 min 后，样品置于冰浴，加入水，用微量移液器彻底混匀。 4