核纤层和富含核纤层组分的制备实验

组织制备 1. 切碎组织，用加 250 mmol/L 蔗糖的 H 溶液清洗组织/组织培养物： 溶液 H： 15 mmol/L PIPES，pH 7.2 80 mmol/L KCl 15 mmol/L NaCI 0.5 mmol/L 精咪 0.2 mmol/L 精胺 1 mmol/L DTT 1 mmol/L PMSF 细胞匀浆 2. 清洗后，在二倍体积的含 250 mmol

卵母细胞收集和制备 1. 从成熟的雌性非洲爪蟾取整个或部分卵巢，在含 88 mmol/L NaCl，1 mmol/L KCl，0.9 mmol/L MgSO4，0.33 mmol/L Ca（NO3）2，0.41 mmol/L CaCl2，2.4 mmol/L NaHCO3，10 μg/ml 苯青霉素，10 μg/ml 硫酸链霉素和 10 mmol/L Na-HEPES，pH 7.6 的溶液中

胚收集和制备 1. 可用任一种方法收集果蝇胚（Oregon R P2 或任何其他的野生系）。 制备匀浆 2. 直接在 9 倍体积的抽提缓冲液（溶液 E ) 中融化冻存胚。 溶液 E： 250 mmol/L 蔗糖 50 mmol/L NaCl 50 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.5)，( 25℃) 5 mmol/L MgCl2 1 mmol/L PMSF 1 mm

卵母细胞收集和制备 1. 从成年海蚌中剥离卵巢和卵母细胞。然后在 1 g 重力作用下，用经 0.22 μm Millipore 滤器过滤的海水清冼几次卵母细胞。 匀浆 2. 为了在不激活卵母细胞的情况下使卵黄膜去稳定，将洗过的卵母细胞悬浮于含 1.4 mol/L 甘油，15 mmol/L NaHPO4，pH 8.0，和 40 μg/ml 五羟黄酮的溶液中，室温孵育 8 分钟。 3. 500