磷酸酶制备实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验来源「细胞实验指南」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

蛋白丝/苏氨酸磷酸酶,1型和2A型(PP-1和PP-2A)

一、组织/细胞制备和提取 1. 配制下列溶液： (1) 缓冲盐清洗液： 20 mmol/L 的 MOPS 缓冲液，pH 7.5（配成 100 ml） 5 mmol/L 的 EDTA 5 mmol/L 的 EGTA 120 mmol/L 的 NaCl (2) 抽提缓冲液 20 mmol/L 的 MOPS，pH 7.5（配成 10 ml） 5 mmol/L EDTA 5 mmol/

膜蛋白酪氨酸磷酸酶（PTP）

1. 用 1 ml 含有 1% NP-40 去污剂的提取缓冲液提取颗粒部分（按照上面组织/细胞的制备和提取所述方法准备）15 分钟，用一个小匀浆器固定在微型离心管里匀浆或者通过微量移液器吸头尖反复吸入和排出悬浮液以确保沉淀分散。 2. 在 13000 g 的冷冻微型离心机中离心悬浮液 10 分钟。 3. 上清加到 1.0cm x 28 cm 的 Superose 6 柱子（Pharmacia)